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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
483
- 英文名:
Coelenterazine hcp
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格:
1×250μg
特别提示:包括腔肠素hcp在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:腔肠素hcp
英文名称:Coelenterazine hcp
产品货号:SY0239
产品规格:1×250μg
本品为粉末形式供应的腔肠素hcp(Coelenterazine hcp),是天然腔肠素的衍生物之一。腔肠素hcp-水母发光蛋白复合物的荧光强度比天然腔肠素复合物高190倍,且量子产量高和Ca2+反应速度快。非常适合用于钙离子水平的检测。
腔肠素(Coelenterazine)是自然界中资源最丰富的天然荧光素,是绝大多数海洋发光生物(超过75%)的光能贮存分子。腔肠素可作为许多荧光素酶的底物,比如海肾荧光素酶(Rluc),Gaussia分泌型荧光素酶(Gluc),以及包括水母发光蛋白(aequorin)和薮枝螅发光蛋白(Obelia)在内的光蛋白(Photoproteins)。其发光原理是:以腔肠素为底物的荧光素酶在有分子氧的条件下,氧化腔肠素,产生高能量的中间产物,并在此过程中发射蓝色光,峰值发射波长约为450~480nm。与甲虫(或萤火虫)荧光素/荧光素酶系统不同,腔肠素/荧光素酶系统不需要三磷酸腺苷(ATP),因此更便于体内生物荧光的研究。因此,腔肠素常用作基于荧光分析的报告基因检测以及活体动物检测的发光底物。
腔肠素还能在酶非依赖性的氧化体系中自发荧光,细胞和组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子能够增强该自发光信号,因此其也可用来检测细胞/组织内活性氧(ROS)水平。
腔肠素具有能量转移的特性— —生物发光共振能量转移(Bioluminescence Resonance Energy Transfer,BRET),利用此特性,当与荧光蛋白如GFP的突变体(增强的黄色荧光蛋白,EYFP)联合使用,在底物腔肠素存在的情况下,荧光素酶(如Rluc)催化底物发生蓝光,能量随之转移到EYFP上,发出绿光(~530nm)。这两个蛋白的相互作用可以通过Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白两者间的相互关系来评估,适用于研究蛋白-蛋白之间的相互关系。另外,由于BRET的信号可通过比较绿光和蓝光的量来进行测定,消减了因细胞数、细胞类型和其他实验变量而引起的数据变量,适用于高通量筛选如药物开发。
更为重要的一个功能,水母发光蛋白复合物(Aequorin)由22kDa的水母蛋白(Apoaequorin protein)、分子氧和底物腔肠素组成。只有当钙离子(Ca2+)与该复合物结合后,腔肠素才能被氧化生成高能量产物Coelenteramide,同时释放出CO2和蓝色荧光(~466 nm)。正是此Ca2+依赖性的反应过程(见图1),使得腔肠素非常适用于监测活细胞内钙离子水平。与常规的荧光钙离子指示剂相比,其主要具有以下几个优点:
1)能检测较大范围的钙浓度 – 从0.1 μM至 >100μM;
2)样品无自体荧光,背景荧光低于使用荧光钙离子指示剂;虽然信号比使用荧光钙离子指示剂弱,但是通过成像仪器可以得到更高的信噪比,因此具有更高的灵敏度。
3)水母发光蛋白复合体能够稳定维持在细胞内,使其能够进行数小时至数天的钙离子监测。
图1. 腔肠素作为水母发光蛋白辅助因子的Ca2+依赖反应流程
目前商业化的腔肠素应用最普遍的是天然腔肠素(Coelenterazine native),另外还有很多腔肠素衍生物如Coelenterazine h、Coelenterazine 400a、Coelenterazine cp、Coelenterazine f、Coelenterazine hcp、Coelenterazine n等被一一合成。理论上这些腔肠素可用于相同的实验,但是由于其发光波长,细胞膜渗透性,光量子效率上的差异,使得其在相同应用上表现出不同的实验效果。因此非常有必要根据具体实验目的选择最合适的腔肠素底物。
英文别名:CLZN-hcp
CAS:123437-32-1
分子式:C25H25N3O2
分子量:399.48 g/mol
溶解性:溶于甲*或者乙醇,不可溶于DMSO
外观:黄色至橘色粉末
纯度:≥95%(TLC)
结构:
注意事项
1)腔肠素hcp粉末最好使用惰性气体-氮气或氩气,在密封良好的塑料管中避光保存于-20℃,长期保存于-70℃。管内即使有少量空气进入,可能造成腔肠素hcp氧化失活,使量化分析的结果难以在不同试验间进行比较。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
除了腔肠素hcp,CLZN-hcp,我公司还供应以下相关产品:
| 货号 | 名称 | 规格 |
| SY0069 | PPARγ-Luc荧光素酶报告基因质粒 | 1μg |
| SY0070 | NFAT-Luc荧光素酶报告基因质粒 | 1μg |
| SY0071 | Nanog-Luc荧光素酶报告基因质粒 | 1μg |
| SY0075 | KLF4-Luc荧光素酶报告基因质粒 | 1μg |
| SY0077 | IRF1-Luc荧光素酶报告基因质粒 | 1μg |
| SY0079 | HSF-Luc荧光素酶报告基因质粒 | 1μg |
| SY0098 | p53-Luc荧光素酶报告基因质粒 | 1μg |
| SY0099 | GAL4-Luc荧光素酶报告基因质粒 | 1μg |
| SY0111 | AAT-promoter-Luc荧光素酶报告基因质粒 | 1μg |
| SY0124 | ELK1-Luc荧光素酶报告基因质粒 | 1μg |
| SY0128 | FXR-Luc荧光素酶报告基因质粒 | 1μg |
| SY0143 | YY1 Luc荧光素酶报告基因质粒 | 1μg |
| SY0145 | STAT6-Luc报告基因质粒 | 1μg |
| SY0150 | ERSE-Luc报告基因慢病毒颗粒 | 50μl×4管; 2×10e7TU/ml |
| SY0161 | RBP-JK-GFP报告基因质粒 | 1μg |
| SY0164 | NFAT-GFP报告基因质粒 | 1μg |
| SY0167 | MEF2-GFP报告基因质粒 | 1μg |
| SY0185 | ATF6-GFP报告基因质粒 | 1μg |
| SY0196 | Myc-GFP报告基因质粒 | 1μg |
| SY0198 | E2F-GFP报告基因质粒 | 1μg |
| SY0209 | C/EBPβ-GFP报告基因质粒 | 1μg |
| SY0225 | RORα2-GFP报告基因质粒 | 1μg |
| SY0235 | 腔肠素h | 1×500μg |
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文献和实验荧光素酶 自然界中的荧光素酶:是自然界中能够产生荧光的酶的系统,如发光真菌,发光海星,发光鱼,发光节虫,发光甲虫等。 萤火虫荧光素酶:目前常用的萤火虫荧光素酶来源于北美萤火虫(Photinus pyralis),是一个61KDa的单体酶,无需表达后修饰,直接具有完全酶活性,反应需要底物荧光素以及ATP、氧气、镁离子等。 海肾荧光素酶:来源于海肾(Renilla reniformis),是一个36KDa的单体酶,表达后无需修饰,即可具有完全酶活,反应只需要腔肠素
目前,在荧光素底物中,D-荧光素和腔肠素使用得比较多。不同的底物应采用不同的注射方式。D-荧光素可通过尾静脉注射(IV)或腹腔注射(IP)。然而,腔肠素因其会被血液中的氧气氧化,产生较高的背景荧光,所以只能通过 IV 的方式注射到实验动物体内。 对于 D-荧光素来讲,IV 和 IP 同样会影响生物发光的结果。 IV 与 IP 比较结果图 (Keyaerts M, Verschueren J, Bos TJ, et al.. Dynamic bioluminescence imaging
和其它甲虫荧光素酶是分子量相对较大的酶,分子量大小约为 60kDa,底物为 D-荧光素,需要辅助因子 ATP 和 Mg2+。FLuc 发出的是黄红光,发射光峰值为 560nm。 海肾荧光素酶(RLuc)是一种从 Renilla reniformis 分离的分子量大小为 36 kDa 的荧光素酶。与 FLuc 相比,海肾荧光素酶的底物和辅助因子需求不同。RLuc 在氧气存在下催化腔肠素,产生 480 nm 的蓝光。海肾萤光素酶因其与 FLuc 在底物要求和光输出方面的差异而可用于双重报告检测。 近年
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