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406
- 英文名:
Heparin
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格:
5ml/100ml/1000ml
特别提示:包括肝素琼脂糖磁珠在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:肝素琼脂糖磁珠
英文名称:Heparin
产品货号:CZ009
产品规格:5ml/100ml/1000ml
产品简介:
Heparin磁珠具有快速的磁响应性、丰富的肝素密度、极高的物理化学稳定性等特点。一方面,可作为亲和层析的配基,能够与生长因子及抗凝血酶AT Ⅲ等生物分子发生特异性结合;另一方面,由于表面带有大量负电性硫酸根离子基团,可作为一种阳离子交换介质,在一定pH条件下,与带正电的蛋白具有强的结合能力。
与传统柱层析纯化方式相比,Heparin磁珠无需对粗蛋白样品进行预处理(如:反复繁琐的离心,费时费力的过滤操作),此外,无需控制流速及柱压,不需要昂贵的层析设备。对于熟练的操作者来说,在很短时间内就能完成高纯度目的蛋白的提取,且能轻松实现多个样品的平行处理,实现高通量的蛋白纯化。
适用于抗凝血因子III、凝血因子、核酸结合蛋白、脂蛋白、干扰素、类固醇受体、凝血酶及类凝血酶等生物大分子的分离纯化。
保质期:2~8℃可稳定保存,保质期2年
注:1. 蛋白结合量与目标蛋白特性相关,此处仅作参考值;
2. 1 mL磁珠悬液中含有100 μL磁珠。
产品优势:
1. 丰富的结合位点,加强了与配体的特异性结合
2. 磁响应速度快,减少操作时间
3. 磁珠具有良好的分散性和重悬性,提高操作的便捷性
4. 配基具有良好的物理化学稳定性,提高了实验结果的可靠性及可重复性
操作流程(以纯化人血浆中抗凝血酶 Ⅲ为例):
1. 样品处理:取人血浆1 mL加入至1.5 mL EP管中,接着加入500 μL Binding Buffer,充分混匀。
2. 磁珠预处理:将Heparin磁珠漩涡振荡30 s,使磁珠充分重悬;取1 mL 10%(v/v)磁珠悬液置于另一新的1.5 mL EP管中。对磁珠悬液进行磁性分离,弃上清液,用1 mL Binding Buffer洗涤2次,磁性分离,管中磁珠可直接用于抗体分离。
3. 蛋白吸附:在步骤2预处理的磁珠管中加入步骤1处理的样品溶液,漩涡振荡均匀,在室温下(约25℃)将EP管置于垂直混合仪混匀15~30 min,使样品和磁珠充分接触并吸附,然后进行磁性分离,移弃上清液。
4. 磁珠洗涤:向EP管中加入1 mL Binding Buffer,漩涡振荡重悬磁珠1 min后进行磁性分离,移弃上清液;该操作重复3次。
注意事项:根据对洗脱蛋白SDS-PAGE图谱,在Binding Buffer中可适当加入一定浓度NaCl,该步骤可有效的去除非特异性吸附蛋白,使操作者获得更高浓度的目标蛋白。
5. 蛋白洗脱:在上述完成磁珠洗涤的EP管中加入0.2 mL Elution Buffer,用移液器吹打或者涡旋振荡下迅速重悬,然后在室温下(约25℃)将EP管置于垂直混合仪混匀10~15 min后进行磁性分离,收集 上清液至新的EP管。
6. 磁珠再生:向EP管中加入1 mL纯化水,漩涡振荡重悬磁珠后进行磁性分离,移弃上清液,重复操作3次;接着改用Binding Buffer洗涤磁珠3次。磁珠多次使用后会有沉淀蛋白、强疏水性蛋白、脂蛋白等杂质非特异性吸附到磁珠上,为了保证磁珠的使用效率,建议进行在位清洗(CIP)。
7. 在位清洗(CIP):依次采用0.1 M NaOH、8 M 尿素、纯化水、Binding Bufdfer洗涤磁珠2次;最后加入1 mL Storage Buffer(20%乙醇)重悬磁珠 ,置于2~8℃保存。
注意事项:
1. 本产品不宜冷冻、干燥或离心操作。冷冻、干燥和离心等操作会引起磁珠团聚,不易于重悬和分散,并且影响磁珠表面功能基团的化学活性。
2. 在使用本产品前,请务必充分振荡或超声使磁珠保持均匀的悬浮状态。
3. 使用过程中可根据需求,用纯化水或缓冲液磁吸洗涤磁珠 2~3次,以去除保存液中乙醇。
4. 本产品需与磁性分离设备配套使用。
5. 盐浓度与pH值均会影响特异性蛋白的结合与洗脱,客户需自行摸索不同蛋白的结合和洗脱条件,以保证 蛋白纯化量和纯度。
6. 本产品仅供研究使用。
除了肝素琼脂糖磁珠,,我公司还供应以下相关产品:
| 货号 | 名称 | 规格 |
| CZ006 | 钴离子螯和His-tag蛋白纯化磁珠 | 5ml/2×50ml/4×250ml |
| CZ007 | GST融合蛋白纯化磁珠 | 5ml/2×50ml/4×250ml |
| CZ009 | 肝素琼脂糖磁珠 | 5ml/100ml/1000ml |
| CZ016 | 1μm链霉亲和素磁珠 | 1ml/10ml/100ml |
| CZ018 | Mag NHS磁珠 | 1ml/5ml/50ml |
| CZ019 | NHS磁珠 | 1ml/5ml/50ml |
| CZ026 | 羧基磁珠(1μm,10mg/ml) | 5ml/50ml |
| CZ027 | 羧基磁珠(2μm,10mg/ml) | 5ml/50ml |
| CZ030 | 氨基磁珠(500nm) | 5ml/50ml |
| ML002 | 硅基磁珠(200nm,100mg/ml) | 2ml |
| ML003 | 硅基磁珠(单分散,20mg/ml) | 2ml |
| ML005 | 羧基磁珠(100nm,30mg/ml) | 2ml |
| ML006 | 羧基磁珠(300nm,10mg/ml) | 2ml |
| ML007 | 化学发光磁珠(10mg/ml) | 2ml |
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文献和实验了一线技术支持常被问到的问题,希望这篇纯干货能帮助大家顺利升级打怪,早日驾驭 IP、co-IP。 IP、co-IP、pull-down 简介 IP(Immunoprecipitation),免疫沉淀:是利用固定在磁珠或琼脂糖树脂等基质上的特异性抗体对抗原进行小型亲和纯化的一种方法 Co-IP(co-Immunoprecipitation),免疫共沉淀: co-IP 是一种常用的鉴定蛋白-蛋白相互作用的方法,其基本实验流程和IP类似,通过使用诱饵蛋白(IP 中的抗原,bait protein)特异
「诱饵」蛋白,「诱饵」蛋白的互作蛋白称为「猎物」蛋白。「诱饵」蛋白与「猎物」蛋白结合后,利用靶蛋白—抗体— Protein A/G —磁珠/琼脂糖珠的结合方式获取复合物,再通过 SDS-PAGE、Western blot 或质谱等方法进一步对复合物中的靶蛋白进行分析。 免疫共沉淀方法简单,是识别感兴趣蛋白质的相互作用、深入了解其结构和功能的初步实验方法。但是它也有相应的局限性,比如很难验证两种蛋白质是否直接发生相互作用、不能得到这种相互作用亲和力等定量信息等。因此需要在相互作用分析与筛选后,使用
&Tag 技术混淆,CUT&Tag 技术在异染色质位点上有很好的结果,Henikoff 推荐的阳性对照就是存在于异染色质区域的 H3K27me3,且我们的客户在 H3K27me3 以及 H3K27AC 上都有很好的结果。 4. ConA beads 的作用是什么?如果没有 ConA beads ,能否用离心法代替? ConA beads 是经过 Concanavalin A(刀豆蛋白A,ConA)包被的磁珠。ConA 是一种从刀豆和豌豆等籽粒中提取出来的植物
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