cDNA第一链合成试剂盒(逆转录试剂盒)(RT试剂盒)

特别提示：包括cDNA第一链合成试剂盒(逆转录试剂盒)(RT试剂盒)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：cDNA第一链合成试剂盒(逆转录试剂盒)(RT试剂盒)
英文名称：1st-Strand cDNA Synthesis Kit
产品货号：BTN60906
产品规格：50次

本试剂盒提供合成cDNA第一链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶(M-MuLV RT)高效合成mRNA的全长cDNA拷贝。

产品特点：
1. 使用突变的反转录酶，内源RNase H活性低。
2. 最长可合成13Kb的cDNA。
3.可以使用oligo-dT、随机引物和RNA 专一性引物三种引物(前两种本试剂盒提供)。
4. 总RNA、poly(A)+RNA或特殊RNA 均可作为模板。
5.可用于cDNA文库构建、RT-PCR、探针标记等。

试剂盒组成：

成分	规格
MMLV(含RI)	100μl
RT Buffer(含dNTP)	300μl
Oligo(dT)18引物(0.5μg/μL)	50μl
Random Primer(0.2μg/μL)	50μl
RNase-free水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：合成PCR用的1st-strand cDNA
1. 按下表配制RT反应体系：

RNA 模板
总RNA	100-500ng
或poly(A)mRNA	10-500ng
或专一的RNA	0.01pg-500ng
注意：RNA样品不能含有基因组DNA污染。

引物

Oligo(dT)18(0.5μg/μL)	1μl
或随机引物(0.2μg/μL)	1μl
或RNA 模板专一性引物	15-20 pmol
注意：随机引物与RNA 模板的比例跟cDNA 合成的平均长度成反比。
RNase-free水	补水到13μL

2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
3. 再加入5μl RT Buffer(含dNTP)。
4. 37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA 模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则改成25℃ 5分钟。
5. 加入2μL MMLV逆转录酶(含RI)，反应终体积为20μL。
6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。此步为RT反应。
7. 70℃保温10分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的cDNA可以直接作为PCR 模板使用，不需要纯化。

二：合成建文库用的1st-strand cDNA
1. 按下表配制RT反应体系:

RNA模板
poly(A)mRNA	1μg
或专一的RNA	0.5-1μg
注意：RNA样品不能含有基因组DNA污染。
引物
Oligo(dT)18(0.5μg/μL)	1μl
或随机引物(0.2μg/μL)	1μl
或RNA模板专一性引物	100 pmol
注意：随机引物于RNA模板的比例跟cDNA合成的平均长度成反比。
RNase-free水	补水到13μL

2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
3. 再加入5μl RT Buffer(含dNTP)。
4. 37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则改成25℃ 5分钟)。
5. 加入2μl MMLV逆转录酶(含RI)，反应终体积为20μL。
6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。此步为RT反应。
7. 70℃保温10分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的cDNA可以用于第二链cDNA的合成或放置在-20℃长期保存。

三：用对照模板合成cDNA(需要用同位素，需要对照的客户需要单独跟我司联系)
1. 按下表配制RT反应体系:

对照RNA模板(0.5μg/μL)	2μl 引物
Oligo(dT)18(0.5μg/μL)	1μl
或随机引物(0.2μg/μL)	1μl
或对照专用引物	2μl
RNase-free水	补水到13μl

2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
3. 再加入5μL RT Buffer(含标记dNTP，本试剂不提供)。
4. 37℃保温5分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是25℃。
5. 加入2μL MMLV 逆转录酶(含RI)，反应终体积为20μL。
6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。
7. 加1μL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8.电泳检测。合成的cDNA的量一般有加入RNA总量的50%以上，电泳一般能出现1.1Kb的片段(如果使用随机引物，将出现多个小片段)。

除了cDNA第一链合成试剂盒(逆转录试剂盒)(RT试剂盒),，我公司还供应以下相关产品：



名称：硫酸镁溶液(PCR级MgSO4溶液)
货号：BTN130840
规格：5mL
本产品为专门用于PCR的MgSO4溶液，浓度10mM，可以用于调节MgSO4的最佳浓度。MgSO4为常用的PCR增强剂之一。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

名称：一步式RT-PCR Mix
货号：BTN130609
规格：1mL
本产品是基于Tth DNA聚合酶的单酶一管式RT-PCR试剂盒。Tth DNA聚合酶通过其逆转录酶活性合成cDNA，再通过其DNA聚合酶活性进行PCR扩增。它跟常规MMLV和AMV的最大区别是逆转录过程可以在高温进行，能有效打开RNA的二级结构，其示意图如下：

同时操作简单一步完成，其操作流程图如下：


产品特点：
1.中途添加试剂，省去反复打开和关闭反应管盖的麻烦，便于同时处理多个检测样品。
2.样品之间的交叉感染和纵向感染的危险性比较低，可以避免假阳性。
3. 改良了酶的品质，实现了优良的检测敏感度。
4. 即开即用，非常方便。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

名称：RNase抑制剂
货号：RFT107
规格：2000U|5×2000U
本RNase抑制剂是一种大肠杆菌表达的重组蛋白，可以通过非竞争性方式按1:1比例和RNase A、RNase B或RNase C结合，并抑制这三种酶的活性，保护RNA不被这三种酶降解。但本RNase Inhibitor不能抑制RNase I、T1、T2、H、U1、U2和CL3的酶活性。本品浓度为40U/μl

对于cDNA合成、体外转录、体外翻译等常见的反应体系中，为保护其中的RNA不被RNase降解，RNase Inhibitor推荐用量为最终浓度1-2U/μl。

特点：不含DNA内切酶和外切酶，用于各种RNA相关反应，防止RNase的污染。
用途：用于cDNA合成，体外转录，体外翻译，以及mRNA-protein复合物分离纯化等过程中保护RNA不被降解；还可用于特定RNase活性的鉴定等。
来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为人类胎盘中编码该酶的基因。
分子量：约49.6 kDa(单体)。
活性定义：将能够抑制5ng RNase A的50% 活性的酶量定义为一个活性单位。
活性检测条件：100mMTris-HCl (pH7.5)，1.2mMEDTA，0.1mg/ml BSA，100ng/ml RNase A，0.1mg/ml E.coli [3H]-RNA，50mg/ml yeast RNA，8mMDTT。
纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶。
储存溶液：20mM HEPES-NaOH (pH7.5)，50mM NaCl，8mM DTT，0.5mM Detergent，50% (v/v) glycerol。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

名称：EX Taq DNA Polymerase
货号：GL2300
规格：500U|1000U
用途：
EX Taq DNA聚合酶

注意事项：
保真性高于普通Taq DNA聚合酶，扩增效率较高，附送10x PCR buffer。

储存条件：-20℃，36个月

名称：Pfu DNA Polymerase
货号：GL2302
规格：500U|1000U
用途：
高保真DNA聚合酶

注意事项：
保真性高于普通Taq DNA聚合酶，附送10x PCR buffer。

储存条件：-20℃，36个月