第一链cDNA合成试剂盒库存

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名称：第一链cDNA合成试剂盒库存
产地：国产|进口
规格：50次|100次
品牌：百奥莱博
英文名：BalbScript 1st Strand cDNA Synthesis UltraMix
  本试剂盒是以mRNA或者总RNA为模板，高效合成第一链cDNA。本试剂盒使用M-MuLV反转录酶（JN0011），它的RNA酶H的活性与AMV反转录酶相比较低。该反转录酶可耐受42-50℃温度.试剂盒中含有重组RNA酶抑制剂（E055），可耐受55℃高温，有效防止RNA降解。试剂盒同时含有Oligo(dT)18，只以有poly(A)尾巴的mRNA为模板合成cDNA，使用本试剂盒也可采用序列特异性引物。合成的第一链cDNA能直接用作PCR或荧光定量PCR的模板，第二链cDNA的合成或线性RNA扩增，也可用于需要用带有放射性或非放射性核苷酸标记第一链cDNA的实验。

试剂盒组成：

 

组份	JN0002-20次	JN0002-100次
M-MuLV反转录酶（200 U/μl）	25μl	120 μl
RNA酶抑制剂(40 U/μl)	25 μl	120 μl
5xM-MuLV Buffer	150 μl	500 μl
dNTP（10mM）	50 μl	250 μl
Oligo(dT)18（100 μM）	25 μl	120 μl
GAPDH正向引物(10 uM)	20 μl	20 μl
GAPDH反向引物(10 uM)	20 μl	20 μl
Water，nuclease-free	2x1.25 ml	2x1.25 ml

注：2×RT-PCR Reaction Buffer中包含Taq DNA聚合酶、dNTP、Mg2+、RNase Inhibitor以及反应缓冲液。

注意事项：
1、用DEPC处理实验用到的所有管子和枪头，或者购买已经证明无核酸酶的实验用具，整个实验过程戴手套并经常更换手套，避免RNA酶的污染。
2、确保所用试剂及超纯水中无RNA酶污染。
3、纯化过的RNA要保证不含有盐，金属离子，乙醇和*酚，因为以上成分会干扰第一链cDNA的合成反应。可采用乙醇沉淀RNA的方法去除掉痕量污染物。

实验步骤：
I.第一链cDNA合成
1、融化后，将试剂盒中各组分混匀并稍微离心，离心后置于冰上。
2、按顺序加入下表中的反应物。
3、可选优化步骤。如果RNA模板GC含量高或者含有二级结构，可先将模板和引物的混合液轻轻混匀，短暂离心，65℃孵育5分钟，冰上冷却，离心，再置于冰上冷却。
4、轻轻混匀，离心。
5、如果使用Oligo(dT)18或者基因特异型引物，42℃孵育60分钟。如果使用随机六聚体引物，25℃.先孵育5分钟，随后42℃孵育60分钟。
6、70℃加热5 min终止反应。
反应产物可直接用于PCR反应或者在-20℃保存少于一周的时间。如想延长保存时间，建议使用-70℃保存。

II.第一链cDNA的PCR扩增
合成的第一链cDNA可直接用于PCR或qPCR。第一链cDNA反应液体积不能超过PCR反应体系的1/10。通常50 μl的PCR反应体系中，第一链cDNA反应液加入2μl。

应用实例：

图例一）小鼠胚胎肝脏总RNA抽提。
按百奥莱博RNA抽提试剂盒操作说明书抽提，起始组织量50mg；


图例二）百奥莱博第一链cDNA合成后PCR扩增目的基因。
泳道1：某进口品牌；泳道2：百奥莱博第一链cDNA合成试剂盒扩增结果。（1ug总RNA反转录后，取1ul用于PCR检测，目的基因：GAPDH）

常用反应体系（20μl）

模板RNA	总RNA（0.1 ng～5 μg） poly(A) mRNA（10 pg～0.5 μg） 特异性RNA（0.01 pg～0.5 μg）
引物	Oligo (dT)18引物1μl 随机六聚体引物1 μl 基因特异性引物15～20 pmol
5×Reaction Buffer	4ul
RNA酶抑制剂(20U/ul)	1ul
dNTP(各10mM)	2.0μl
M-MuLV反转录酶（200U/ul）	1μl
ddH2O(Nuclease Free)	至20μl

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第一链cDNA合成试剂盒库存关键词：第一链cDNA合成试剂盒,BalbScript 1st Strand cDNA Synthesis UltraMix,JN0002


·重组人FGFRL1(成纤维细胞生长因子受体样因子1)(带His标签)
编号：JN0236
英文名称：Recombinant Human Fibroblast Growth Factor Receptor-Like 1
规格：10μg|50μg|500μg|1mg
本品由我们的哺乳动物表达系统制备，目的基因编码的Ala25-Pro378在C端含有His标签。

FGFRL1质量控制：＞95%(还原性SDS-PAGE)。

FGFRL1制剂：冻干品

FGFRL1保存：
冻干蛋白可在-20℃长期保存，室温也可稳定保存3周。
复溶蛋白溶液可在4～7℃保存2～7天。
复溶后建议分装冻存在-20℃，可保存3个月，应避免反复冻融。

FGFRL1复溶：
1、试剂开盖前请先离心。
2、复溶浓度应大于100 μg/ml.
3、冻干蛋白溶于ddH2O中
4、复溶后根据使用量分装保存，避免反复冻融。

关于FGFRL1：
Fibroblast Growth Factor Receptor-Like 1 (FGFRL1) is a single-pass type I membrane protein that belongs to the FGF receptor family. The mature human FGFRL1 consists of a 354 amino acid extracellular domain (ECD) with 3 Ig-like C2-type domains, a 21 amino acid transmembrane segment, and a 134 amino acid cytoplasmic domain. FGFR1 expressed in various tissues, preferentially in cartilaginous tissues and pancreas. It highly expressed in the liver, kidney, heart, brain and skeletal muscle, weakly expressed in the lung, small intestine and spleen. FGFRL1 has a negative effect on cell proliferation.

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