大肠杆菌膜蛋白提取试剂盒

特别提示：包括大肠杆菌膜蛋白提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：大肠杆菌膜蛋白提取试剂盒
英文名称：Escherichia coli membrane protein extraction kit
产品货号：HR0115
产品规格：50T/100T

大肠杆菌膜蛋白提取试剂盒是一种高效的高产膜蛋白提取试剂盒。大肠杆菌膜蛋白提取试剂盒可以从各种大肠杆菌菌体中提取膜蛋白，可用于纯化蛋白的粗品制备及膜蛋白制备。提取过程简单方便。该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，下游应用范围广，提取液裂解细胞的能力较温和，需要根据实际样本情况优化裂解时间。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒，也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理。

储存条件：蛋白酶抑制剂-20℃保存；蛋白提取液、溶解液2-8℃保存。
【注】
●蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃保存，开盖使用后-20℃保存
●蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期：一年。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

产品特点：
1．使用方便，从细菌中提取蛋白不需经过超声破碎等前处理。
2．将蛋白提取的时间缩短至 30分钟-1小时。
3．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5．蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。
该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
6．本品不含 EDTA，可以用于金属螯合层析等下游应用。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● 移液器、吸头 ●离心机及离心管
● 振荡器、涡旋振荡器 ●冰箱，冰盒

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
●蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
●可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

1．每500μl冷的提取液A中加入5μl提取液B和2μl蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
【注】：
● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
●以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。
2．离心收集菌体，用PBS洗菌体2次。
3．按每100mg-150mg湿重菌体样本加入500μl冷的提取液A(大约菌体和提取液体积比1:3-1:5，完全淹没菌体即可)，吹打混匀，在2-8℃振荡1-2小时，至菌体裂解完全，菌体沉淀减少。
【注】：
● 必须在2-8℃条件下振荡，不可以室温振荡。
● 使用振荡器或摇床的较低转速，保持液体稍微晃动即可。
● 液体量少不好振荡时，可以盖紧离心管，将离心管倾斜放置或者横置，以利于液体振荡。
● 如果没有2-8℃持续振荡条件，也可直接置2-8℃冰箱静置1-2小时，中间每隔10分钟涡旋振荡混匀即可。
4．将菌体提取液在2-8℃低温下12000×g力离心5分钟，弃沉淀，取上清。
【注】：
● 必须在2-8℃条件下离心。不可以室温离心。
5．将上清液在37℃水浴10分钟。
6．在37℃，1000g离心3分钟。
【注】：
● 此步骤必须37℃条件下离心。
● 入股离心机不可控温，可以不离心，延长上一步骤水浴时间，至溶液分层清晰即可。
7．此时液体分为2层，小心移除上层溶液，留管底部下层，大约50μl液体。
【注】：
● 下层为黏稠状液体。
● 未完全分好层时看上去可能像3层，保留中间的界面层即可。
8．用1-2倍体积的膜蛋白溶解液溶解该下层部分，即得大肠杆菌膜蛋白样品。
9．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】：
● 建议用BCA法进行蛋白定量。
●蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

除了大肠杆菌膜蛋白提取试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：
 

货号	名称	规格
BTN70102B	蛋白marker(14.4～97.4kD)	20次
WE0299	NC膜(0.22μM)	1 sheet
SNM427	DAB显色试剂盒(20×)	60ml|20ml
SNM464	Western Blot检测试剂盒	20T|10T
RFT087	Western封闭液II	100ml
KFS028	一步法免疫组化试剂盒(兔、鼠通用)	300 片
KFS064	WB抗体清除液(强碱性)	500ml
KFS066	二抗稀释液(Western Blot)	100ml
SY0347	DTT 二硫苏糖醇	10g
SY0354	4×Tris-HCl-SDS分离胶缓冲液，pH8.8	250ml
SY0374	12%预制胶，12孔	1盒（10块）
SY0399	链霉亲和素琼脂糖纯化树脂	5ml
QN0880	PAGE凝胶银染试剂盒	1L
QN1107	2×蛋白上样缓冲液(含β-巯基乙醇)	10ml
QN1196	抗荧光衰减封片剂(含DAPI)	5ml|25ml
HR0015	磷酸化蛋白富集试剂盒	50T/100T
HR8002	细胞蛋白快速提取试剂盒(离心柱法，2D电泳用)	50T/100T
HR8009	骨组织蛋白提取试剂盒(2D电泳用)	50T/100T
HR0291	蛋白酶抑制剂混合物(细菌蛋白提取)	1ml
HR0296	蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物	250μl/1ml
HR0348	洗涤液(Western)	100ml
HR8215	外泌体蛋白提取试剂盒	50T/100T
GL1457	抑胃肽酶溶液(Pepstatin,1mg/ml)	1ml