(OP9细胞)小鼠骨髓基质细胞

(OP9细胞)小鼠骨髓基质细胞
培养条件
MEMα-培养基20%胎牛血清
细胞生长：贴壁生长
细胞形态：成纤维细胞样
细胞数量：1×106个细胞数
细胞传代：1：2传代
细胞特性：OP9细胞株源自新生的op/op小鼠颅盖。因编码M-CSF的基因中的一个突变它不能生成有功能的巨噬细胞克隆刺激因子(M-CSF)。M-CSF的存在对胚胎干细胞(ES)分化成血细胞而不是其他巨噬细胞有抑制功能。OP9细胞可以用于与小鼠胚胎干细胞共培养以诱导胚胎干细胞分化成成红血球来源的、骨髓来源的和B细胞谱系的血细胞。与OP9共培养不需要外源的生长因子或复杂的胚胎结构。这个系统对研究造血细胞的发育和分化的分子机理有用
细胞纯度：98％
细胞活力：87％（ViabilitybyTrypanBlueExclusion）
细胞检测：细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
细胞冻存：液氮冻存（基础培养基+10%DMSO+20%FBS）
细胞运输：干冰运输（1Vial）或活细胞运输（T-25flasks）
细胞用途：只可用于科研不可用于临床诊断和治疗

(OP9细胞)小鼠骨髓基质细胞处理程序
在培养瓶中接种细胞并在培养基中完全填充培养基以防止运输过程中细胞的丢失。
1、收到后，目视检查培养物是否有微生物污染的宏观证据。
使用倒置显微镜（配备有相位传感器），仔细检查是否有微生物污染的证据。还检查以确定大多数细胞是否仍然附着在烧瓶底部？在运输过程中，培养物有时被粗略地处理，并且许多细胞经常分离并悬浮在培养基中（但仍然是可行的）。
2、如果细胞仍然附着，无菌去除5至10毫升的运输介质。可以节省运输媒介以重复使用。在5%℃的空气中，在37℃下培养细胞，直到它们准备进行传代培养BGC-823人胃腺癌细胞（低分化）没有附着，无菌地移除烧瓶的全部内容物，并以1000rpm离心5至10分钟。取出运输介质并保存。在10毫升这种培养基中重新沉淀颗粒细胞并加入25厘米的烧瓶中。在空气中5%℃下，在37℃下孵育，直至细胞准备进行传代培养。

(OP9细胞)小鼠骨髓基质细胞冷冻保存程序
1、去除和丢弃培养基。
2、简要冲洗细胞层0.25（w/v）trypsin0.53mm EDTA溶液去除所有痕迹血清含有胰蛋白酶抑制剂。
3、加入2至3毫升的胰蛋白酶-EDTA溶液瓶中，倒置显微镜下观察细胞到细胞层是分散的（通常在1到10分钟）。
注意：为了避免结块，不要在击打或摇晃瓶子时搅拌细胞，等待细胞分离。难以分离的细胞可以放置在37°C以促进扩散。
4、加入6～8毫升的完整生长培养基，轻轻吸液，抽吸细胞。
5、去除胰酶EDTA溶液，将细胞悬液到离心管和旋转约5 1000rpmfor 10分钟。
6、低温保存培养液中的上清液和复苏细胞。
7、将细胞转移至低温瓶，1ml／瓶。
8、低温容器中的细胞Frozen（NalgENα5100-01）。