(NR8383细胞)大鼠肺泡巨噬细胞

(NR8383细胞)大鼠肺泡巨噬细胞
培养条件
F12K20%胎牛血清
细胞生长：悬浮生长
细胞数量：1×106个细胞数
细胞传代：维持细胞浓度在1×104~105/ML每周2~3次
细胞特性：NR8383(正常大鼠1983年8月3日)来源于肺灌洗时的正常大鼠肺泡巨噬细胞。细胞在gerbil肺细胞连续培养液存在下培养了大约8-9个月。随后不再需要外源生长因子。通过有限稀释法从单个细胞克隆并亚克隆NR8383细胞并三次用软琼脂亚克隆。细胞表现出巨噬细胞的特性吞噬酵母多糖和铜绿非特异性脂酶活性Fc受体氧化降解分泌IL-1TNFbeta和IL-6可重复地响应外源生长因子。NR8383细胞响应博莱霉素分泌TGFbeta前体。在博莱霉素刺激下TGFbetamRNA表达也上升。细胞对内毒素敏感。1-10钠克/毫升的LPS水平抑制增生达50%。即使达到0.001毫克/毫升的水平LPS抑制还是无毒且在后续过程中可逆的。NR8383细胞株提供了高响应的肺泡巨噬细胞的均一来源可以用于体外研究巨响细胞相关活性
细胞纯度：93％
细胞活力：87％（ViabilitybyTrypanBlueExclusion）
细胞检测：细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
细胞冻存：液氮冻存（基础培养基+10%DMSO+20%FBS）
细胞用途：只可用于科研不可用于临床诊断和治疗

(NR8383细胞)大鼠肺泡巨噬细胞处理程序
在培养瓶中接种细胞并在培养基中完全填充培养基以防止运输过程中细胞的丢失。
1、收到后，目视检查培养物是否有微生物污染的宏观证据。
使用倒置显微镜（配备有相位传感器），仔细检查是否有微生物污染的证据。还检查以确定大多数细胞是否仍然附着在烧瓶底部？在运输过程中，培养物有时被粗略地处理，并且许多细胞经常分离并悬浮在培养基中（但仍然是可行的）。
2、如果细胞仍然附着，无菌去除5至10毫升的运输介质。可以节省运输媒介以重复使用。在5%℃的空气中，在37℃下培养细胞，直到它们准备进行传代培养BGC-823人胃腺癌细胞（低分化）没有附着，无菌地移除烧瓶的全部内容物，并以1000rpm离心5至10分钟。取出运输介质并保存。在10毫升这种培养基中重新沉淀颗粒细胞并加入25厘米的烧瓶中。在空气中5%℃下，在37℃下孵育，直至细胞准备进行传代培养。

(NR8383细胞)大鼠肺泡巨噬细胞冷冻保存程序
1、去除和丢弃培养基。
2、简要冲洗细胞层0.25（w/v）trypsin0.53mm EDTA溶液去除所有痕迹血清含有胰蛋白酶抑制剂。
3、加入2至3毫升的胰蛋白酶-EDTA溶液瓶中，倒置显微镜下观察细胞到细胞层是分散的（通常在1到10分钟）。
注意：为了避免结块，不要在击打或摇晃瓶子时搅拌细胞，等待细胞分离。难以分离的细胞可以放置在37°C以促进扩散。
4、加入6～8毫升的完整生长培养基，轻轻吸液，抽吸细胞。
5、去除胰酶EDTA溶液，将细胞悬液到离心管和旋转约5 1000rpmfor 10分钟。
6、低温保存培养液中的上清液和复苏细胞。
7、将细胞转移至低温瓶，1ml／瓶。
8、低温容器中的细胞Frozen（NalgENα5100-01）。