200目细胞过滤筛

小鼠脾脏单细胞悬液制备流程及注意事项

小鼠脾脏单细胞悬液制备流程 a)研磨法 小鼠颈椎脱臼处死，置于75%酒精浸泡5 min后，取出小鼠，置于无菌操作台上，左腹侧朝上。 小鼠左腹侧中部剪开小口，撕开皮肤，暴露腹壁，可见红色长条状脾脏。 脾脏下侧提起腹膜，剪开后上翻，暴露出脾脏。用镊子提起脾脏，眼科剪分离脾脏下面的结缔组织，取出脾脏，并浸泡于干净的PBS溶液中。 将脾脏置于200目筛网中，用组织研磨棒轻轻研磨至没有明显红色块状物。 用15 mL PBS冲洗筛网，并将冲洗液收集于15 mL离心管，300 g离心5 min，弃上清

小鼠胸腺单细胞悬液制备流程及注意事项

小鼠胸腺单细胞悬液制备流程 1.用颈椎脱臼法处死小鼠，75%酒精浸泡5 min后，取出小鼠置于无菌操作台上，腹部朝上。 小鼠胸骨下方剪开小鼠的胸腔，可看到白色透明胸腺，呈两叶分布，位于两肺的前方，胸骨的正后方。 取出胸腺并浸泡于干净的PBS溶液中。 将胸腺置于200目筛网中，用组织研磨棒轻轻研磨至没有明显块状物。 用15 mL PBS冲洗筛网，并将冲洗液收集于15 mL离心管，300 g离心5 min，弃上清。 用细胞染色缓冲液重悬胸腺细胞，并调整细胞浓度至1×107/mL。 注意

原代胎儿肾小球系膜细胞培养

取引产胎儿肾，无菌操作，1小时内完成。2用生理盐水冲洗干净。取肾皮质，用小外科剪剪成碎麽。依次研磨过80目，100目，200目筛网，不断用生理盐水冲洗，最后在200目筛网上收集肾小球，先用0。4%的胶原酶四消化半小时，接种于50ML的培养瓶里，加含有20%小牛血清的DMEM培养基放二氧化碳培养箱培养。三天后可在倒置镜下观察见有细胞贴壁生长。一周后换液一次，以后约三到四天就能长满瓶底。此时可常规传代，到第三代时，基本上生长的全是肾小球系膜细胞了，这时要进鉴定了，方法包括：常规HE染色，细胞