2×RNA上样缓冲液(不含溴化乙锭)

特别提示：包括2×RNA上样缓冲液(不含溴化乙锭)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：2×RNA上样缓冲液(不含溴化乙锭)
英文名称：2×RNA Loading Buffer(Without Ethidium Bromide)
产品货号：SY0254
产品规格：5×1ml

2×RNA上样缓冲液用于琼脂糖凝胶电泳或聚丙*酰胺琼脂糖凝胶电泳前RNA 样本的处理。缓冲液组分经过优化，其中包括指示剂溴酚蓝和二甲*青FF，电泳时可肉眼监控RNA 的迁移，并含有甲酰胺用作一种变性剂和RNA稳定剂。

1×RNA loading buffer各组分：47.5% Formamide, 0.01%(w/v)SDS, 0.01%(w/v) Bromphenol Blue, 0.005%(w/v) Xylene Cyanol, 0.5mM EDTA.

使用方法
1）将RNA样品与等体积的2×RNA上样缓冲液充分混匀。
2）对于变性PAGE(尿素)/Agarose凝胶电泳，需在65-70℃加热5-10min变性RNA，并在加热的同时用枪头吸取电泳缓冲液小心冲洗点样孔中多余的尿素；对于非变性PAGE/Agarose凝胶电泳则无需此步加热，直接进行下一步。
3）上样即可。

保存：室温可稳定保存1周，4 ºC可保存1个月，-20 ºC可稳定保存2年。

除了2×RNA上样缓冲液(不含溴化乙锭),，我公司还供应以下相关产品：



名称：一站式DNA尿素-PAGE电泳套装
货号：BTN90317
规格：30次
本品是专门用于DNA 尿素-PAGE电泳的一站式试剂盒。

产品特点：
1.一站式，即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。用户不需要单独准备各种成分。
2.可用于DNA 测序、AFLP、DDRT、TGGE和RNase 保护实验等。
3. 安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙*酰胺。
4.电泳后可直接用于银染、EB染色等实验。

产品组成：

成分	规格	保存
电泳级尿素	210g	常温
电泳级丙*酰胺	77.34g	常温
电泳级甲叉双丙*酰胺	2.67g	常温
10×TBE电泳液	250ml	常温
电泳级TEMED	1.5ml	4℃，避光
电泳级过*酸铵	1g	常温
2×尿素-PAGE上样液	1ml	-20℃
说明书	1份

储存条件：常温运输，保存条件见上表，有效期一年。

使用方法：

一、PAGE浓度和交联度的选择指南
尿素-PAGE一般推荐用29：1(丙*酰胺：甲叉双丙*酰胺)的交联度，
在此条件下，DNA片段和zuì适PAGE浓度对应关系如下：

单链DNA长度	zuì佳PAGE浓度	二甲*青FF迁移率 对应的长度	溴酚蓝的迁移率 对应的长度
50-400nt	8%	160nt	45nt
200-1000nt	5%	260nt	65nt
750-2000nt	3.5%	460nt	100nt

二、制备尿素-PAGE胶
1. 配制尿素-PAGE胶(这是配制100mL胶的用量，配制更大体积的胶则需以此用量为基础按比例增加)
A：新鲜配制10%的APS(过*酸铵)：按每0.1 克过*酸铵干粉加1mL超纯水的比例将水加到装有硫酸铵干粉的1.5mL EP 管中，摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
B：新鲜交联度为29:1的40%的丙*酰胺-甲叉双丙*酰胺溶液(AB溶液，下同)：在装有77.34 g电泳级丙*酰胺干粉的瓶中加入约120mL自备的去离子水，然后将全部甲叉双丙*酰胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙*酰胺溶液冲洗出来以避免粉末有毒粉末飘出。甲叉双丙*酰胺溶解度低，不会溶解在这少量溶液中)。充分摇晃混匀后所得溶液即40%的AB溶液。配制40%而非30%的原因是这样可以在下步留出足够空间加尿素。
C：配尿素-PAGE胶：在一个250mL的三角瓶中，先按下表的用量加入去离子水、40%AB溶液和10×TBE缓冲液。丙*酰胺单体溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。

PAGE胶浓度	各成分用量(尿素为克，其余单位是mL)			补水到(mL)
	尿素	40%AB溶液	10×TBE缓冲液
5%	42	12.5	5.0	100
6%	42	15.0	5.0	100
7%	42	17.5	5.0	100
8%	42	20.0	5.0	100
9%	42	22.5	5.0	100
10%	42	25.0	5.0	100
11%	42	27.5	5.0	100
12%	42	30.0	5.0	100

D：搅拌溶解，然后用滤纸过滤。zuì好能抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*酰胺聚合反应)，无条件也可以不脱氧。
E：加入500μL 10%APS和100μL TEMED，迅速摇匀后倒胶。
F:在胶的液面距离达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
G:室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
H: 拔出梳子，用0.5×TEB液冲洗加样孔。

三、样品准备
2. 对一般样品、测序样品、微卫星DNA、AFLP样品、DDRT样品、RPA样品：将样品跟上样液1:1 混合，95℃ 3分钟变性，然后放冰上待用。
3. 对TGGE样品：可以直接上样。

四：电泳
4. 将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入足够0.5×TEB电泳液。
5.预电泳5-30分钟将冰上放置的样品上样。
6.连接电源线，打开电源开关。根据胶的大小选择功率(固定功率可以固定产热，这样不容易发生过热而使胶板破裂的现象。如果固定电流或电压，产热都将随电泳时间而变化，不好控制)。对小胶一般用5-6W 固定功率，大胶用15-25W 固定功率。
7. 终止电泳，取出凝胶进行后续的处理(如银染)。注意：如果银染，必须延长固定时间以便让洗出尿素，否则残留尿素会干扰后面的银染。