- ￥600 - 2200
- caiyou
- 6个月
- 上海
- C02711B
- 2026年04月24日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 供应商：
上海彩佑实业有限公司
- 检测范围：
6个月
- 检测方法：
ELISA
- 应用：
仅供科研
- 适应物种：
人
- 标记物：
人
- 样本：
血清
- 规格：
48T/96T
| 规格： | 48T | 产品价格： | ￥600.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 96T | 产品价格： | ￥2200.0 |
a、使用前所有试剂应置于室温平衡至少30分钟。
b、本试剂盒可以直接加样，如浓度过高，可以进行适当比例的稀释，计算时应将结果乘以稀释的倍数（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。
c、洗涤液为25倍浓缩液，使用前将所有洗涤液倒入500ml或1L的烧杯中，用双蒸水定容到500ml即为工作液。
d、标准品的稀释：先用标准品/样品稀释液浆标准品冻干粉定容到150μl，然后漩涡混匀30秒即为标准品原液(24小时内用完)。取5支干净的Eppendorf管，每管加150μl的标准品稀释液，分别标记上32ng/ml，16ng/ml，8ng/ml，4ng/ml，2ng/ml。取150μl标准品原液加入标记32ng/ml 的管中，混匀后同样取出150μl，加入下一管，以此类推直至最后一管。] （见下图）
零孔：直接加标准品/样品稀释液。
原液64ng/ml 32ng/ml 16ng/ml 8ng/ml 4ng/ml 2ng/ml
e、生物素抗原的稀释：低速离心，然后抽取生物素抗原稀释液1ml到浓缩型生物素抗原中，漩涡混匀15秒，至冻干粉完全溶解，然后将所有液体倒入稀释液瓶中，漩涡混匀后即为生物素抗原工作液(一周内用完)。
f、亲和素-HRP的稀释：低速离心，使浓缩液全部沉到管底，将浓缩亲和素-HRP全部转移到稀释液瓶中，漩涡混匀后即为亲和素-HRP工作液(一周内用完)。
6、样本前处理
a、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
b、血清：室温血液自然凝固10-20分钟，2000-3000转/分，离心 20分钟左右。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
c、血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，2000-3000转/分，离心 20分钟左右。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
d、尿液：用无菌管收集，2000-3000转/分，离心 20分钟左右。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
e、细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。2000-3000转/分，离心 20分钟左右。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS (PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。2000-3000转/分，离心 20分钟左右。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
f、组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。2000-3000转/分，离心 20分钟左右。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
7、洗板方法
a、手工洗板：先洗去酶标孔中的的液体，在吸水纸上拍干，然后每孔加入300μl稀释好的洗涤液，轻轻摇晃30秒，然后甩掉，在吸水纸上拍干，重复4-5次。
b、洗板机洗板：洗板机洗板比较便捷，但应操作熟练后使用。
8、详细操作程序
a、使用前请先将试剂盒在室温下平衡半小时。
b、空白孔不加样，只加显色剂A，B和终止液用于调零。
c、标准品孔：每孔加入稀释好的标准品50μl，零孔加入标准品/样品稀释液50μl，然后加入生物素抗原工作液50μl。
d、样品孔：加入样品50μl，然后加入生物素抗原工作液50μl。
e、轻轻摇晃，盖上封板膜，37℃培养箱中孵育30min。
f、将25倍浓缩洗涤液用蒸馏水25倍稀释后备用。
g、第一次洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
h、加入50μl亲和素-HRP到标准品孔和样品孔中，轻轻摇晃，盖上封板膜，37℃培养箱中孵育30min。
i、第二次洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干
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文献和实验和NF-KB能被分泌到细胞外吗？ ws88523758 不要意思，更正一下 我测NF-KB用的是细胞核提取液，用专门的细胞核提取试剂盒；而ikb用的样品是细胞质提取液，是按其说明书自己买试剂盒提取的。 我测的ikb的值较低，我在ELISA用的每孔加50、100、200、300ul，及用1个100mm的培养皿的细胞提取的细胞质，均不能提高ikb的od值，是否存在加大浓度太大，可能再稀释会好点？有人做过吗？ 最后先谢谢magichunter的回复
owen79 各位大侠好，小弟愚问一下，我想测定NF-KB活化后细胞核内的量，这需要提取核蛋白，但是蛋白量太少，提取出来能否测出NF-KB啊！thank you ! ronaldo_zj 1. 通过提取细胞核、细胞浆内的蛋白来行western blot检测NF-kappa B 的表达情况是可以的，因为很多时候是通过NF-kappa B转位来实现活化的，所以提取的时候我不知道楼主是自己配制试剂提取还是用试剂盒提取的，我建议
上海西唐生物科技有限公司 021-55229872, 65333639 www.westang.com 人核转录因子 ( NF - kB )ELISA 试剂盒 原理 本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA 法。用抗人 NF- kB 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 NF- kB 与单抗结合，加入生物素化的抗人NF- kB ，形成免疫复合物连接在板上，辣根
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