分析换膜过滤器

【求助】质粒转染细胞，western鉴定不行，求助

whm5869 我构建了一个质粒，包括目的基因片段和一小段启动子，测序结果完全正确，我们实验室的工作人员说理论上应该表达但是我转染细胞做WESTERN鉴定，就是不表达，请问这是为什么啊，谢谢各位大侠了 whm5869 我用的是polyjet转染试剂，操作等基本没问题，谢谢大家了 pharmaceutic 以前我站构建质粒的时候也遇到过这种问题，最后换了一个载体以后就表达了。最后分析认为不同

质粒测序正常，WB杂不出来，是什么原因？

liuruya 问别人要了个带GFP-tag（GFP-N2载体）的质粒，目的基因1.4kb，分子量约52kD，转染293T细胞能见荧光，WB杂不出来，设置了阴性和阳性对照证实不是WB的技术问题。后来又换了个flag-tag，仍然杂不出来WB。仔细检查过序列，不存在移码的问题，非常费解。有同学分析是空间位阻问题，不知换个tag是不是能解决这个问题。有同学遇到过这种问题么，或者帮忙分析一下可能的原因。谢谢！！！ zhuqueleee

【求助】western

。你的目的蛋白和一抗的关系是什么，这点很重要。分析了这点之后，如果显色时间在1分钟之内，目的带可能是特异带。确信下面的带是特异的，建议换一抗，换其他封闭液。 llh刘丽华 目的蛋白和一抗的关系是什么?我不明白这事什么意思啊，我的目的蛋白RAC1蛋白啊，一抗是兔抗大鼠RAC1多克隆抗体啊！ coffeeshine 目的蛋白是在什么宿主细胞里表达的？ llh刘丽华 哦，是大鼠平滑肌细胞上表