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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海机纯实业有限公司
- 库存:
大量
- 英文名:
HBE
- 生长状态:
贴壁生长
- 运输方式:
干冰
- 规格:
详见说明书
有关HBE(人支气管上皮细胞)无菌技术:
1. 实验进行前,无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌,以70 % ethanol 擦拭无菌操作台面,并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后,才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株,且即使培养基相同亦不共享培养基,以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后,将实验物品带出工作台,以70 % ethanol 擦拭无菌操作台面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后,再进行下一个细胞株的操作。
2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如试管架、吸管、吸取器或吸管盒等可以暂时放置,其它实验用品用完即应移出,以利于气流之流通。实验用品以70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在台面的中央无菌区域,勿在边缘的非无菌区域操作。
3. 小心取用无菌的实验物品,避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或容器瓶口,亦不要在打开的容器正上方操作实验。容器打开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约45° 角取用,尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
4. 工作人员应注意自身的安全,须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染的细胞株应特别小心操作,并选择适当等级的无菌操作台(至少Class II)。操作过程中,应避免引起aerosol 的产生,例如DMSO 及TPA 等,并避免尖锐针头的伤害等。
HBE(人支气管上皮细胞)保证运输中细胞的正常生长,关于其价格、报价、货期,请咨询机纯生物。
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文献和实验实验材料: 1. 手术切除的含支气管的正常肺组织 2. 胰蛋白酶/EDTA液:0.05%胰蛋白酶,0.5mmol/L EDTA 3. 6孔培养板:用多聚赖氨酸包被 4. 不含Ca2+ 和Mg2+的1×PBS(pH=7.2),添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素和200000U/L庆大霉素,pH7.4 5. 手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪,眼科镊 6. 离心管(15ml、50ml) 实验方法: 1. 将分离的两片肺叶组织用含双抗的1×PBS
冲洗,以除去血液和粘液。 2. 将气管或支气管的一端结扎,另一端插套管并固定。用注射器经套管注入1%中性蛋白酶,至气管充盈为止。将气管浸泡于PBS中,在37℃条件下消化20min。 3. 用注射器抽取培养液,将注射器插入套管,反复冲洗,以分离气管上皮细胞。然后,将气管或支气管游离端的结扎线剪断,回收管腔内的细胞悬液。 4. 用200目不锈钢网筛过滤,将滤液离心(1000r/min,10min)。弃上清液后,再用培养液洗涤离心1次。 5. 用培养液悬浮沉淀细胞,调整细胞
利用 Millicell 培养小室培养皮肤及肺类器官的实验方案
细胞培养技术支持将人支气管上皮细胞从 16HBE14o-等细胞分化为成熟的肺表型。使用 ALI 细胞培养技术培养的支气管上皮细胞可以形成极化细胞层和紧密连接,并且可以分化和呈现功能性纤毛。ALI细胞培养方法依赖于 Millicella/Transwell插入式细胞培养小室来支持类体内观察到的假复层粘液纤毛表型的发展。 图 1. 在传统2D(左)与3D气液界面(ALI)(右)中培养的气道上皮细胞。 气液界面细胞培养方案 用ECM 混合物涂抹组织培养瓶:
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