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- 百奥莱博
- KFS035-ZXO
- 北京
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
366
- 保质期：
6个月
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格：
300T
特别提示：包括Cy3标记抗大鼠免疫荧光染色试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：Cy3标记抗大鼠免疫荧光染色试剂盒
产品货号：KFS035
产品规格：300T
适用于细胞或组织切片的免疫荧光染色。在有适当的一抗检测特定的目标蛋白时，就可以使用免疫荧光染色试剂盒检测到红色、绿色或蓝色等荧光。免疫荧光染色试剂盒－抗大鼠Cy3，含有Cy3标记的山羊抗大鼠IgG (H+L)抗体，可以用于检测大鼠来源的相应一抗，观察到的颜色为非常鲜艳的红色。
Cy3（Ex/Em：550nm/570nm）是近年新开发的一种红色荧光探针。它比绝大部分其它的红色荧光探针更加明亮，更加不容易淬灭，而且背景更低。
本试剂盒提供了含有荧光标记抗体稳定剂的免疫荧光染色二抗稀释液，可以确保荧光标记抗体稀释后在4℃可以保存长达6个月，并且在6个月内至少可以重复使用10次。
本试剂盒含有抗荧光淬灭封片液，可以使荧光更加持久。本试剂盒对于六孔板内的细胞样品或常规切片，至少可以检测300个样品。
注意事项：
1. 需荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。
2. 在使用抗荧光淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭，但仍宜尽量避光，特别是需要尽量缩短在荧光显微镜下的观察时间。
3. 荧光物质均易发生淬灭，染色后宜尽快进行荧光显微镜下的观察。如果不能及时观察可以4℃避光保存，但存放时间通常不宜超过一周，随着存放时间的延长可能会导致观察效果越来越差。免疫荧光染色效果的好坏和一抗的关系非常密切。建议选购有较多文献报道的并注明可以用于免疫荧光染色的一抗用于本实验。
4. 如果观察时发现荧光过弱，可以适当提高一抗的浓度；如果荧光还是比较弱，可以适当提高荧光标记抗体的浓度。
5. 需自行配制用于免疫荧光染色的相关试剂，需自备盖玻片和载玻片。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
除了Cy3标记抗大鼠免疫荧光染色试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：
名称：Bradford蛋白定量试剂盒
货号：WE0275
规格：800次微孔板(100管次)
Bradford 法是最简单和快速的比色蛋白定量方法。 这一方法基于考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后， 产生蓝色化合物，反应迅速而稳定。反应化合物在465-595 nm处有最大的光吸收值，化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系，因此可通过检测595 nm的光吸收值的大小来计算蛋白的含量。本产品将传统的Bradford方法进行了改良，最大限度的加大蛋白定量的线性范围，变异性小于普通考马斯亮蓝染色法，灵敏度范围为100-1,500μg/ml。使用本产品反应迅速，颜色产物1小时内保持稳定。本试剂盒适用于多种缓冲液系统，不受金属离子、还原剂和螯合剂的干扰。
试剂盒组成：
| 组成 | 规格 |
| Bradford Protein Assay Reagent | 2×100ml |
| BSA Standard Solution(2mg/ml) | 2ml |
注意事项：
1、BSA标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致(可用1×PBS或0.9%生理盐水进行稀释)。
2、本试剂盒不适合含有去污剂的蛋白定量，具体干扰物质(具体见附表1)，可采用BCA蛋白定量试剂盒(WE0276)或其他蛋白定量产品。
3、所测蛋白分子量必须大于3 kD。
使用方法：
1、稀释BSA标准品：用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。
| 管号 | 稀释液用量(μl) | BSA标准品用量(μl) | BSA标准品最终浓度(μg/ml) |
| A | 0 | 100 | 2000 |
| B | 50 | 150 | 1500 |
| C | 200 | 200 | 1000 |
| D | 200 | 200(从C管中取) | 500 |
| E | 200 | 200(从D管中取) | 250 |
| F | 200 | 200(从E管中取) | 125 |
| G | 200 | 0 | 0(空白) |
2、试管检测(检测范围：100-1500μg/ml)
1)按上表稀释标准品，将30μl稀释好的BSA标准品分别加到作好标记的试管中。
2)取干净的试管，分别加入30μl待测蛋白样品(原液或稀释液)，并作好标记，推荐每个测定做2-3个平行反应。
3)向步骤1)和步骤2)的试管中各加入1.5ml Bradford Protein Assay Reagent，充分混匀，室温放置10分钟。
4)用分光光度计测定595 nm处的吸光值。
5)绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
注意：数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线，可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。
6)如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。
3、微孔检测(检测范围：100-1500μg/ml)
1)将按表1稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各5μl分别加到作好标记的96孔板微孔中。
2)每孔加入250μl Bradford Protein Assay Reagent，充分混匀，盖上96孔板盖，室温放置10分钟。
3)用酶标仪测定595 nm处的吸光值。
4)绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
注意：数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线，可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。
5)如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。
附表1. 干扰物质表
| 化合物 | 耐受浓度 |
| 缓冲液 | |
| 乙酸盐 | 0.6M |
| 甘氨酸 | 0.1M |
| HEPES | 0.1M |
| MES | 0.7M |
| MOPS | 0.2M |
| Na+-柠檬酸 | 50mM |
| PIPES | 500mM |
| 磷酸钠/磷酸钠 | 1M |
| 乙酸钠 | 0.6M |
| Tris | 2M |
| 盐类 | |
| 硫酸铵 | 1M |
| NaCl | 1M |
| 尿素 | 6M |
| 极性化合物 | |
| 甘油 | 99% |
| 还原剂 | |
| β-巯基乙醇 | 1M |
| DTT | 1M |
| 去垢剂和变性剂 | |
| Brij35 | 干扰 |
| 脱氧胆酸纳 | 0.25% |
| CHAPS | 1% |
| NP-40 | 干扰 |
| 辛葡糖 | 2% |
| SDS | 0.1% |
| Tween-20 | 干扰 |
| Triton X-100 | 0.1% |
| 糖类 | |
| 蔗糖 | 1mM |
| 螯合剂 | |
| EDTA | 100mM |
| EGTA | 50mM |
| 其他 | |
| HCl | 0.1M |
| NaOH | 0.1M |
| NAD | 1mM |
| 苯 | 5% |
储存条件：2～8℃
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文献和实验FITC标记的B抗体染色，根据两种抗体的动物种属不同，可用直接法也可用间接法，结果A抗原呈现橘红色荧光，而B抗原呈现黄绿色荧光。在应用中，常用的方法是免疫荧光组织化学中间接法和SABC-Cy3法相结合。例如，在实验设计时，选择小鼠抗大鼠A和兔抗大鼠B作为两种不同的特异性一抗，相匹配的二抗分别为FITC-抗小鼠IgG和生物素化―抗兔IgG。进行双重染色时，由于两种一抗种属来源不同，可把一抗混合使用。孵育结束后洗涤未结合的一抗，滴加二抗时，先加人生物素化―抗兔IgG(二抗)孵育，洗涤后，滴加SABC-Cy3
物。一般SP三步法二抗选择Biotin标记的二抗，以与后面的SP结合反应；而免疫荧光染色就需要购买不同荧光素标记的二抗，如罗丹明、FITC、Cy3等常用荧光素。这主要与后面有无三抗和三抗种类有关。（3）选择IgM还是IgG。一般一抗是IgM，那么二抗就选择IgM；反之，一抗是IgG，则二抗选择IgG。（4）生产厂家。一般SP三步法我们实验室选择中杉金桥的二抗染色试剂盒，内含有工作液的二抗，故试验中只需摸索一抗的浓度即可，效果还可以；而免疫荧光的二抗我一般选择Jackson ImmnoResearch公司
生物素标的探针。采用了加强型的化学发光试剂，信号强且发光信号可以持续6小时之久，通常压片5-10分钟，一旦结果不理想，允许反复压片。相比同位素需要压片过夜，SpotLight让你当天就得到实验结果，可谓安全、方便、快速多了；而相比常规化学显色法，SpotlLight化学发光法的灵敏度要高的多，信号更清晰、干净，而且不会出现一旦显色过度就不可逆转的毛病。 5) Clontech Atlas Glass Fluorescent Labeling Kit 这是一个间接荧光探针标记试剂盒，标记好的荧光
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