免疫组化SP法检测试剂盒(小鼠IgG)

特别提示：包括免疫组化SP法检测试剂盒(小鼠IgG)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：免疫组化SP法检测试剂盒(小鼠IgG)
英文名称：SP Kit(Mouse)
产品货号：QN2714
产品规格：3ml|6ml|18ml|110ml

本试剂盒适合于一抗为小鼠IgG的免疫组化实验DAB显色。SP法检测试剂盒是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质（PI=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，因此基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。

试剂盒组成：

组分	3ml	6ml	18ml
封闭液（5%BSA）	3ml	6ml	18ml
3% H2O2	3ml	6ml	18ml
生物素-羊抗小鼠IgG浓缩液	30μl	60μl	180μl
链酶亲和素-POD浓缩液	30μl	60μl	180μl
稀释液	10ml	20ml	60ml
20×DAB显色液A	0.3ml	0.6ml	1.8ml
20×DAB显色液B	0.3ml	0.6ml	1.8ml

保存：如果长时间不使用，请将所有试剂存放于-20℃，如经常使用，可将封闭液，3%H2O2和20×DAB显色液B存放于2-8℃以方便使用。

操作步骤（以石蜡切片为例）：
1．切片常规脱蜡至水(三次二*苯，三次乙醇)。
2．3%H2O2室温处理5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
3．可选步聚：
  a、热修复抗原，将切片浸入0.01M柠檬酸钠缓冲液（PH6.0），电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5～10分钟后，反复1～2次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1～2次。
  b、酶消化，滴加消化液，37℃10分钟，PBS（pH7.2-7.4）洗涤2～3次。
  c、跳过此步，直接进入下一步。
4．滴加封闭液，室温20分钟。甩去多余液体，免洗。
5．用稀释液将一抗按一定比例稀释（稀释后的一抗4℃可保存一周），也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃孵育1小时左右或20℃2小时左右，也可4℃过夜。PBS（pH7.2-7.4）洗涤3次，每次2分钟。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）
6．根据用量，用稀释液将生物素-羊抗小鼠IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl生物素-羊抗小鼠IgG浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加生物素-羊抗小鼠IgG工作液，20-37℃孵育30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗涤3次，每次2分钟。
7．根据使用量，用稀释液将链酶亲和素-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl链酶亲和素-POD浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加链酶亲和素-POD工作液，20-37℃，30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗涤4次，每次5分钟。
8．DAB显色：根据用量，用PBS（pH7.2-7.4）配制，按1mlPBS加入50μl 20×DAB显色液A，加入50μl 20×DAB显色液B。充分混匀后滴加到切片上。室温显色，镜下控制反应时间，一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
9．苏木素轻度复染。脱水，透明，封片。显微镜观察。

对于细胞爬片，固定后，PBS漂洗两次，再用0.5% Triton X-100室温孵育20分钟，PBS漂洗两次，3%H2O2处理15分钟；PBS漂洗两次，接上述第4步。
对于冰冻切片，固定后，PBS漂洗两次，接上述第二步。

注意事项：
如果染色背景过高，在SP反应之后，DAB显色之前，用加有0.01-0.02% TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。

除了免疫组化SP法检测试剂盒(小鼠IgG),，我公司还供应以下相关产品：



名称：高灵敏ECL化学发光试剂盒
货号：YT060
规格：共100ml
本Western萤光检测试剂是一种超敏ECL化学发光试剂盒，可与二抗上耦连的辣根过氧化物酶发生化学反应，发出萤光，从而可以通过用X光片压片或其它适当萤光成像设备检测样品。

本试剂盒灵敏度极高，比DAB显色的灵敏度至少高200倍，是进口品牌同类产品的几倍甚至几十上百倍。

本试剂系统发光时间长。在100微升1微克/毫升辣根过氧化物酶标记IgG中，加入100微升本试剂盒的工作液或Pierce公司的SuperSignal West Pico Substrate工作液进行检测。在暗房中，两者均可发出肉眼可见的蓝色萤光，但加入本试剂盒工作液的试管内的亮度明显高很多。zuì初数分钟内加入本试剂盒工作液的试管发光强度是加入SuperSignal West Pico Substrate工作液的试管的3倍。约30分钟后，加入本试剂盒工作液的试管仍然可以发出肉眼可见的较强的蓝色萤光，而加入Pierce公司的SuperSignal West Pico Substrate工作液的试管发出的萤光已经很难用肉眼进行分辨，定量结果显示此时加入本试剂盒工作液的试管发光强度是加入SuperSignal West Pico Substrate工作液的试管的100倍以上。

本试剂盒的高灵敏度可以大大节省宝贵的样品以及非常昂贵的一抗和二抗的用量。同时必须注意适当减少一抗和二抗或样品的用量，以免获得过深的难以比较灰度的条带。

本试剂盒采用全新配方，更加稳定。本试剂盒的两种试剂37℃水浴孵育30天，和4℃保存的试剂相比，对相同样品的检测效果无任何明显差异。此外本试剂盒背景很低，对PVDF膜和硝酸纤维素膜均适用。

储存条件：4℃避光，有效期一年。

名称：小鼠免疫组化(IHC)检测试剂盒
货号：SY0769
规格：150T
本试剂盒可用于检测以小鼠单克隆或多克隆抗体为一抗的免疫组化实验，检测原理基于高特异性高亲和力的链霉亲和素-生物素结合：已固定或培养细胞的抗原与一抗形成抗原抗体复合物，生物素化二抗特异性结合上述复合物，经辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素特异性识别生物素（即抗原所在位置），zuì后经辣根过氧化物酶底物显色即可检测相应抗原。

本品可适用于多种类型样本，如石蜡包埋切片、冰冻切片、培养细胞涂片及血液标本等。

产品组份：

封闭液————————————7.5ml
生物素标记抗小鼠二抗————7.5ml
HRP 标记链霉亲和素————7.5ml
20×DAB底物缓冲液————400µl
20×H2O2浓缩液————400µl
20×DAB浓缩液————400µl

使用方法

1 样品准备
染色前用PBS浸泡组织或细胞涂片10min。石蜡切片于室温下用二*苯常规脱蜡、入水、抗原修复。
【注】：从此步骤起，严禁标本或组织切片干燥。

2 染色（以石蜡切片为例）
1）将处理好的石蜡切片放入3% H2O2-甲*溶液中浸泡10min，以消除内源性过氧化氢酶的作用。
2）清洗：PBS清洗3次，2 min/次。
3）封闭：加一滴封闭液于组织切片上（需完全覆盖待检组织）孵育10min。
4）倒掉或吸干液体（不要冲洗）。
5）一抗：每张切片加2滴（100μl）或适量一抗（需完全覆盖待检组织），湿盒内孵育30-60min。
6）清洗：PBS清洗3次，2 min/次。
7）二抗：每张切片加一滴生物素标记抗小鼠二抗（需完全覆盖待检组织），孵育10min。
8）清洗：PBS清洗3次，2 min/次。
9）酶孵育：每张切片加一滴HRP标记链霉亲和素（需完全覆盖待检组织），孵育10分钟。
10）清洗：PBS清洗3次，2 min/次。
11）制备DAB显色液。
按照【20×DAB浓缩液：20×H2O2浓缩液：20×DAB底物缓冲液：水=1:1:1:20】的比例进行配制显色液，以1张切片为例，分别吸取上述3种溶液各2.5µl溶于50µl去离子水中，充分混匀即可。
【注】：
① DAB显色液需现配现用，避光放置，且在30min内使用。
② 可根据需要一次染多张切片，各种试剂量按照上述比例放大即可。
12）显色：向切片上滴加一滴上述DAB显色液，室温显色2-5min（此步可在显微镜下控制显色程度）。
13）自来水充分冲洗。
14）用合适复染剂复染，盐酸酒精分化。
15）继续后续脱水、透明、封片、镜检。

3结果判定：阳性结果处显处染棕黄或棕褐色。

储存条件：4℃，勿冷冻，有效期一年。