4×蛋白上样缓冲液(含DTT)

特别提示：包括4×蛋白上样缓冲液(含DTT)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：4×蛋白上样缓冲液(含DTT)
英文名称：SDS-PAGE loading buffer,4×(with DTT)
产品货号：QN1168
产品规格：10ml

本产品适用于SDS-PAGE(SDS-变性聚*烯酰胺凝胶电泳)时作蛋白质上样用。其主要成份为SDS，DTT，溴酚蓝，缓冲盐溶液等。SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷，这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异;SDS还可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质结构，消除了蛋白结构之间的差异。zuì终无电荷及结构上差异的蛋白(亚单位)，电泳速度只是与其分子量大小有关。溴酚蓝用作电泳时的指示剂，可大概指示电泳结束的时间。

使用说明：
1、请按每30微升蛋白样品加入10微升上样缓冲液的比例(4倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高，可用双蒸水稀释。
2、混匀后，100℃水浴加热5-10分钟，使蛋白变性。
3、冷却至室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟，取上清直接上样电泳即可。

注意事项：
1、聚*烯酰胺凝胶浓度为8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在30kd左右， 胶浓度为12%时，约在20kd左右，胶浓度为15%时，大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。
2、本试剂因含DTT，有一定的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3、蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝指示剂，PH值受保存温度影响，在低温冻存状态下，溶液可能会呈现深棕色，不影响产品使用。

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期12个月。

除了4×蛋白上样缓冲液(含DTT),，我公司还供应以下相关产品：



名称：哺乳动物专用蛋白酶抑制剂
货号：BTN130527
规格：1mL
本产品为哺乳动物蛋白酶抑制混合液，溶剂为DMSO。专门用于裂解哺乳动物组织(如，血液、肝脏、肌肉等)时，抑制各种内源和外源蛋白酶活性，防止蛋白质降解。本产品抑制谱广，能特异性抑制丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天门冬氨酸蛋白酶和氨基肽酶等各种蛋白酶活性。与各种细菌细胞裂解液兼容，在裂解液中加入1/100体积即可。

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期两年。

名称：一站式SDS-PAGE蛋白电泳套装
货号：BTN80810
规格：30次
SDS-聚*烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是目前电泳法变性分离蛋白质的主要方法，但是单独配制各种溶液十分繁琐，为此我们公司开发了本产品。

产品特点：
1．一站式，即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。
2．安全，将实验人员接触粉末状*烯酰胺的可能降到zuì低。
3．灵活，分开提供的*烯酰胺和甲叉双*烯酰胺便于配制各种比例和浓度的SDS-PAGE，满足分离各种大小不同的蛋白质的要求。
4．使用改良的浓缩胶缓冲液，由于其含有染料，制备的浓缩胶呈蓝色，便于上样时识别加样孔。
5．电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。

产品组成：

成分	规格
*烯酰胺干粉	60g
甲叉双*烯酰胺干粉	3g
分离胶缓冲液，4×	200ml
浓缩胶缓冲液，4×(含染料)	100ml
TEMED	1.5ml
过硫酸*(干粉)	1g
SDS-PAGE上样液，5×	1套(1mL)
SDS-PAGE电泳液，1×(干粉)	1套(20L)
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，但TEMED和5×SDS-PAGE上样液需低温运输，分别在4℃和-20℃有效期一年。

自备试剂：去离子水。

使用方法：
1．第一次使用本产品时需先配制30%*烯酰胺溶液:在本产品提供的装有60克*烯酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水，充分摇晃直到溶解即得200mL 30%*烯酰胺溶液(用手大约摇10-20分钟)。
2．第一次使用本产品时还需配制30%*烯酰胺-甲叉双*烯酰胺(19:1)溶液(30% AB溶液，下同): 不同实验需要加入不同比例的甲叉双*烯酰胺。对SDS-PAGE电泳，*烯酰胺与甲叉双*烯酰胺比例一般在19:1左右，因为此时PAGE胶的孔径zuì小，分辨率zuì高。制备方法是将3g甲叉双*烯酰胺干粉加入到200mL上步配好的30%*烯酰胺溶液中(注意：甲叉双*烯酰胺干粉有神经毒性，避免吸入粉末)。配好的30%ＡＢ溶液zuì好4℃避光保存并在１月内用完。
3．根据平板的面积和胶的厚度估计需要配制的浓缩胶和分离胶的体积。并根据要分离的蛋白质的大小确定选择浓缩胶和分离胶的浓度，参考下表：

蛋白质大小范围(kD)	zuì佳浓缩胶浓度	zuì佳分离胶浓度
15-45	4%	15%
15-60	4%	12.5%
18-75	4%	10%
30-120	4%	7.5%
60-200	不需要	5%

注：如果上样体积少于10μL，可以不需要浓缩胶。
4．配制10%的APS(过硫酸*)：称0.1克过APS干粉到1mL去离子水中，摇晃溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
5．配制分离胶：在一个25mL的三角瓶中，先按下表的用量加入水、30%ＡＢ溶液和4×分离胶缓冲液。以下是配制10mL胶的用量，更大体积则各成分用量需按比例增加。*烯酰胺溶液有神经毒性，一定要戴手套操作。

胶浓度	用量(单位：mL)
	水	30%AB溶液	4×分离胶配胶液
5%	5.83	1.67	2.50
6%	5.50	2.00	2.50
7%	5.17	2.33	2.50
7.5%	5.00	2.50	2.50
8%	4.83	2.67	2.50
9%	4.50	3.00	2.50
10%	4.17	3.33	2.50
11%	3.83	3.67	2.50
12%	3.50	4.00	2.50
13%	3.17	4.33	2.50
14%	2.83	4.67	2.50
15%	2.50	5.00	2.50
16%	2.17	5.33	2.50

6．配制浓缩胶(一般使用4%的浓度)：在一个25mL的三角瓶中，先按下表的用量加入水、30%A B溶液和4×浓缩胶缓冲液。以下是配制10mL 4%浓缩胶的用量，*烯酰胺溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。

胶浓度	用量(mL)
	水	30%AB溶液	4×浓缩胶缓冲液(含蓝色染料)
4%	6.17	1.33	2.50

7．将分离胶和浓缩胶溶液摇晃混匀，抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制*烯酰胺聚合反应，不去除将影响*烯酰胺聚合反应)。
8．分别加入50μL 10%APS和30-50μL TEMED(这是配制10mL分离胶和浓缩胶的用量，更大体积的胶则用量需按比例增加)，迅速摇匀。
9．先灌分离胶，在胶的液面距离顶部1.5 cm的时候，停止灌胶。
10．由于分离胶比重较大，可以立即在上面灌浓缩胶，但灌注时必须小心，不要破坏分离胶和浓缩胶的液面，在浓缩胶液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子，室温聚合30-60分钟。如果不能做到小心灌浓缩胶，则必须待分离胶室温聚合30-60分钟后再灌制。
11．拔出梳子，用1×SDS-PAGE电泳液冲洗加样孔。
12．将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽加入足够的1×SDS-PAGE电泳液。本产品提供20升的SDS-PAGE电泳液干粉，将所有干粉溶解在2 L水中即得10×SDS-PAGE电泳液，用时再稀释成1×工作液。
13．在蛋白质样品中加入5×SDS-PAGE上样液(4μL样品中加1μL上样液)，100℃煮沸3～5分钟。短暂离心，取上清上样。
14．先用10 mA的电流电泳(对0.75mm厚×14cm×14cm的胶)直到染料进入从浓缩胶进入分离胶。
15．将电流增加到15 mA，直到染料进入分离胶底部时终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理。