血浆/血清miRNA提取分离试剂盒

特别提示：包括血浆/血清miRNA提取分离试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：血浆/血清miRNA提取分离试剂盒
英文名称：miRNA Isolation Kit from Serum/Plasma
产品货号：WH0128
产品规格：50次

本试剂盒是专门针对血清、血浆样本miRNA提取而开发的新一代产品。该试剂盒中的裂解液MZA经过长时间研发改良，具有一般裂解液不具有的裂解能力和提取灵敏度，试剂盒中的吸附柱采用特殊的硅基质膜填料，大大增强了其对RNA、尤其是small RNA（<200nt)的吸附能力，提取得到的miRNA纯度更好、质量更高，提取产物可用于RT-qPCR、Northern Blot、DotBlot、PolyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆等常规实验。

产品特点：
·针对性强：专为提取血清/血浆中的miRNA设计，裂解液进行特别优化。
·高效：1h内即可获得高质量的miRNA，提取得率高。
·超纯：柱法纯化，产物无gDNA和盐离子污染。

试剂盒组成：

组分	规格
裂解液MZA	50ml
漂洗液RW	12 ml
去蛋白液MRD	24 ml
RNase-Free ddH2O	15 ml
RNase-Free吸附柱miRelute及2ml收集管	50套
RNase-Free离心管（1.5 ml)	50个

储存条件：室温（15-25℃)，裂解液应在2-8℃避光保存

预防RNase污染，应注意以下几方面：
1．经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。
2．使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3．RNA在裂解液中不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。
4．配制溶液应使用无RNase的水（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1% （v/v)，放置过夜，高压灭菌)。

操作步骤：
第一次使用前应在漂洗液RW和去蛋白液MRD中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。

1．样品处理：每200μl血清或血浆中加入900 μl裂解液MZA，振荡器振荡混匀30 sec至完全匀浆，颠倒混匀。如需使用检测外参（CR100-01),请于完全匀浆之后、颠倒混匀之前加入（1μM浓度，加入1 μl)。
  注意：提取样本量建议不要大于200μl，否则会导致RNA产率以及纯度偏低。裂解液的量严格按照说明书加入，如果加入量少会使界相分离不彻底，zuì终也会导致低的产率与纯度。
2．室温放置5 min，使得核酸蛋白复合物完全分离。
3．加入200μllǜ仿，盖好管盖，剧烈振荡15 sec，室温放置5 min。
4．12000rpm （~13400×g)，4℃，离心15 min，样品会分成三层：黄色的有机相，白色的中间层和无色的水相，RNA主要在水相中，把水相转移到新管中，进行下一步操作。
5．量取转移液的体积，缓慢加入转移液2倍体积的无水乙醇（如：500 μl的转移液加1 ml无水乙醇)，混匀（此时可能会出现沉淀)。将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱miRelute，室温放置2 min,室温12000rpm （~13400×g)离心30 sec，离心后弃掉流出液，保留吸附柱miRelute。
6．向吸附柱miRelute中加入700 μl去蛋白液MRD （请先检查是否已加入乙醇)，室温静置2 min，室温12000rpm （~13400×g)离心30 sec，弃废液。
7．向吸附柱miRelute中加入500 μl漂洗液RW （请先检查是否已加入乙醇)，室温静置2 min，室温12000rpm （~13400×g)离心30 sec，弃废液。
8．重复步骤7一次。
9．室温12000rpm （~13400×g)离心2 min，弃收集管。
  注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，离心后将吸附柱miRelute在室温放置片刻，或置于超净工作台上通风片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的RT等实验操作。
10.将吸附柱miRelute转入一个新的RNase-Free 1.5 ml离心管中，向吸附膜中心位置加15-30 μl RNase-Free ddH2O，室温放置2 min，室温12000rpm （~13400×g)离心2 min。注意：洗脱缓冲液体积不应少于15 μl，体积过小影响回收效率。且RNA应保存在-70℃，以防降解。如果想提高RNA得率，可重复步骤10一次。

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