变性蛋白预制胶(4～15%)

特别提示：包括变性蛋白预制胶(4～15%)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：变性蛋白预制胶(4～15%)
产品货号：QN1283
产品规格：10块

本预制胶是百奥莱博公司开发的高性能低成本聚*烯酰胺预制凝胶。预制胶将凝胶事先配制好，使用者拿来即可上样进行电泳，减去了用户自配凝胶的麻烦，节约了大量的时间。

本预制胶具有如下特点：
★ 特制凝胶和缓冲液配方，分辨率高，条带清晰，电泳效果极佳
★ 保存期长，4℃储存达到18个月胶夹打开极为轻松，无需起撬工具
★ 特制loading guide，加样方便
★ 兼容目前市场各种电泳槽, 如BIORAD，天能和君意东方等
★ 可用于SDS变性及非变性电泳
★ 10%, 12%, 15%及4-15%梯度等多种不同浓度供选择;1.5mm胶厚度;
★ 电泳时间短，在150V电压下， 电泳40-50分钟即可完成
★ 出售时免费附送足量的电泳缓冲液。
★ 玻璃电泳板蛋白吸附率低，电泳效果更好。

本预制胶参数：
★ 胶板尺寸：10.0×8.5×0.45cm
★ 凝胶尺寸：8.0×7.4×0.15cm
★ 浓度：4-15%
★ 分离范围：200-10KDa
★ 孔数:10wells
★ 上样量：35ul
★ 应用：Western blot

储存条件：4℃，有效期18个月

除了变性蛋白预制胶(4～15%),，我公司还供应以下相关产品：



名称：卵白蛋白标准品(2mg/mL)
货号：BTN90610
规格：1mL
本产品是浓度为2mg/mL的卵白蛋白，用做蛋白测定的标准品。

储存条件：低温运输和-20℃保存，有效期一年。

名称：APMSF溶液(10mg/mL)
货号：BTN130535
规格：1mL
本产品为浓度为10mg/mL的水溶液，其工作浓度为10-40μg/mL(10-20μM)。对脒苯基甲磺酰氯(4-Amidino Phenyl Methane Sulfonyl Fluoride，APMSF,p-APMSF)分子量为216.2，溶于水。可以特异性、不可逆抑制胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶活性，如，胰蛋白酶、凝血酶、血浆酶等。毒性比PMSF低，不能抑制胰凝蛋白酶或乙酰胆碱酯酶。


储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期6个月。

名称：即用型免疫组织化学SP试剂盒(Mouse)
货号：KFS031
规格：300 片

名称：细胞膜/细胞浆蛋白抽提试剂盒
货号：SY0327
规格：50T
细胞膜/细胞浆蛋白抽提试剂盒用于快速便捷分离细胞/组织细胞膜和细胞浆蛋白，抽提的膜蛋白不仅包括质膜上的蛋白，也包括线粒体膜、内质网膜以及高尔基体膜等上的膜蛋白。主要工作原理：通过匀浆适度破碎细胞，经低速离心去除细胞核和少数未破碎的细胞产生的沉淀，随后取上清高速离心获得细胞膜沉淀和含有细胞浆蛋白的上清，然后通过优化的膜蛋白抽提试剂从沉淀中抽提获取膜蛋白。整个过程仅需约90min即可完成，抽提得到的蛋白可以用于SDS-PAGE，Western、酶活性测定等后续实验。

膜蛋白抽提试剂中含有蛋白酶抑制剂、磷酸酯酶抑制剂和EDTA等，后续不适合用于蛋白酶、磷酸酯酶等受这些抑制剂影响的酶的活性测定，但抽提获得的膜蛋白或细胞浆蛋白适合用于检测蛋白的磷酸化水平。

按照说明书步骤的用量（细胞2-5×107个；组织约100mg），SY0327可分别进行50个样品的抽提，具体用量可根据不同的样品体积进行调整。

试剂盒组份：
试剂A：50ml
试剂B：15ml

储存条件：-20℃，有效期一年。

注意事项
1）客户需自备PMSF，PMSF需现配现用，建议在抽提试剂加入到样品前2-3min加入，以防失效。
2）利用本试剂盒抽提到的细胞膜/细胞浆蛋白可直接用BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)（Yeasen Cat#20201）测定其浓度，但不适合用Bradford法测定。
3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法
室温融解并混匀试剂A和B，融解后立即置于冰上。取适量的试剂A和B备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使其最终浓度为1mM。

1 样品准备
1）细胞样品
① 细胞收集
贴壁细胞：培养细胞约2-5×107个，PBS清洗一遍，用细胞刮子刮下细胞或用含有EDTA但不含胰酶的细胞消化液处理细胞，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。
【注】：尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的膜蛋白。
悬浮细胞：培养细胞约2-5×107个，离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。
② 细胞清洗
用适量冰浴预冷的PBS轻轻重悬细胞沉淀，取少量细胞用于计数，剩余细胞4℃，600g离心5min沉淀细胞。弃上清，随后4℃，600g离心1min，以沉淀离心管管壁上的残留液体并进一步沉淀细胞，尽最大努力吸尽残留液体。
③ 细胞预处理：把1ml试剂A(含PMSF)加入至上述细胞中，轻轻并充分悬浮细胞，冰浴放置10-15min。
2）组织样品
取约100mg组织，用剪刀尽量小心剪切成细小的组织碎片。加入1ml试剂A(含PMSF)，轻轻悬浮组织碎片，冰浴放置10-15min。【注】：如果组织样品比较少，也可以使用更少的组织量，例如30-50mg，后续试剂的用量及操作步骤不变；组织用量较少时，最后获得的膜蛋白也较少。

2 样品的破碎及破碎效果的鉴定
① 样品匀浆：把细胞悬液或组织样品转移到一适当大小的冰浴预冷玻璃匀浆器中，匀浆约30-50下。【匀浆效果与细胞类型和组织类型相关，不同细胞或组织所需的匀浆次数有所不同，需自行优化。】
② 通常在匀浆30次后取约2-3µl匀浆液滴在盖玻片上并在显微镜下观察，如见细胞核周晕环(A shiny ring around the nuclei)或完整的细胞形态，说明细胞仍完整。如果有70-80%的细胞均无核周晕环和完整细胞形态，说明细胞已经充分破碎，则进行下一步实验。否则，重新匀浆10-30次直到细胞至少70%已经破碎。同时记录对于该细胞的匀浆次数，通常在后续实验时不必再摸索匀浆次数。另外需注意特定的匀浆次数和匀浆器也有关，需同时注意记录使用的是哪一个匀浆器。
【注】：如果没有适当的玻璃匀浆器，对于培养的细胞也可以采用反复冻融法来破碎细胞。把样品在液氮和室温依次反复冻融两次，然后取少量样品在显微镜下检测细胞破碎的程度。如果细胞破碎的程度不足70%，可增加冻融次数，直到细胞破碎的程度大于70%。

3 去除细胞核和未破碎的细胞
在4℃，700g离心10min，小心收集上清液至一新的离心管中。【注】：吸取上清时切勿接触沉淀！可以有约30-50µl上清液残留不予吸取，以保证吸取的上清液有较高的纯度。

4 沉淀细胞膜碎片
在4℃，14000g离心30min，以沉淀细胞膜碎片。

5 收集细胞浆蛋白
吸取上清至1新的离心管中，即为细胞浆蛋白，可-70℃保存备用。吸取上清时可以有30-50µl上清残留，以避免接触沉淀导致上清样品被污染。

6 抽提膜蛋白

4℃，14000g离心10sec，尽最大努力吸尽上清。可以轻轻触碰到沉淀，甚至吸走很少量的沉淀。加入试剂B 200µl(如有必要，也可加大到300µl)，最高速剧烈Vortex 5sec重悬沉淀，冰浴5-10min。重复前述步骤的vortex和冰浴孵育1-2次，以充分抽提膜蛋白。随后，4℃，14000g离心5min，收集上清即为细胞膜蛋白溶液。可-70℃保存备用。对于一些有特殊用途的膜蛋白，可自行配制适当的膜蛋白抽提试剂进行膜蛋白抽提。