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- xuanya
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- XY-TE-0915
- 2025年12月10日
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- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
两年
- 英文名：
E.coli Stbl3 Chemical Competent Cell
- 库存：
900
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
本产品是衍生自大肠杆菌 HB101 菌株，经特殊工艺处理得到的感受态细胞。特别适 用于克隆不稳定载体片段，如含有同向重复序列的慢病毒 DNA 和其他反转录病毒载体。使 用 pUC19 质粒检测，本产品转化效率可达 108。本产品具有下列特点：
1. 此菌株具有链霉素抗性，不存在 lacIqZΔM15，不可用于蓝、白斑筛选。
2. 本产品是复制慢病毒载体系统推荐使用的菌株，对慢病毒载体等较大的质粒转化的效 果好，能够有效抑制长片段末端重复区的重组，减低错误重组的可能性。
3. 非常稳定，能提高慢病毒载体或其他不稳定载体的克隆效率。
4. 菌株基因型为：F – mcrB mrr hsdS20(rB –, mB –) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20(StrR ) xyl-5 λ – leu mtl-1 endA1+
大肠杆菌Stbl3感受态细胞运输及保存：
干冰运输、-80℃保存，有效期半年。
自备试剂：目的 DNA、SOC 或 LB 培养基等
大肠杆菌Stbl3感受态细胞使用方法
1. 取感受态细胞置于冰浴中（或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速插 入冰中）。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100 μL，可以根据实际情况分装 使用。 以下实验以 50 μL 感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的 DNA（根据实际情况加入适量 的 DNA，质粒或连接产物），用手拨打 EP 管底或用移液器轻轻吹打混匀，冰上静置 25 分钟。
3. 42℃水浴热击 45 秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置 2-3 分钟，晃动会降低 转化效率。
4. 每个离心管中加入 450 μL 无菌的 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素）。
5. 30℃，225 rpm 复苏 90 分钟。（当质粒中含有不稳定片段时， 30℃培养可降低错误 重组的概率，若转化 control PUC19 计算转化效率，则需 37℃，225 rpm 复苏 60 分钟。）
6. 5000 rpm 离心 1 分钟收菌，留取 100 μL 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相 应抗生素的 SOC 或 LB 培养基上。
7. 平板倒置放于 30℃培养箱过夜培养。（若转化 control PUC19 计算转化效率，则需 37℃培养过夜）
大肠杆菌Stbl3感受态细胞注意：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的 DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板； 若转化的 DNA 总量较少，可取 200-300 μL 转化产物涂布平板。若预计的克隆数较 少，可通过离心（5,000 rpm，1 分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于 平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于 30℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再 涂布新培养基进行培养。
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文献和实验实验目的1.了解转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。2.学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的方法。3.学习将外源质粒 DNA 转入受体菌细胞并筛选转化体的方法。实验原理转化( Transformation )是将异源 DNA 分子引入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究的基本实验技术。转化中的受体细胞： 转化过程所用的受体细胞一般是限制性修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株，常用 RM 符号表示。转化方法：电击
4．操作步骤 1）大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl2法) (1) 从新活化的E.coli DH5α菌平板上挑取一单菌落，接种于3～5ml LB液体培养中，37℃振荡培养12h左右，直至对数生长期。将该菌悬液以1:100～1:50转接于100ml LB液体培养基中，37℃振荡扩大培养，当培养液开始出现混浊后，每隔20～30min测一次OD600nm，至OD600nm≤0.5时停止培养；(2) 每组取培养液3个2ml转入2ml离心管中，在冰上冷却20-30min，于4℃，4000r／
酶和甲基化酶的突变体（Rˉ，Mˉ），它可以容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代。受体细胞经过一些特殊方法（如电击法，CaCl2，RbCl（KCl）等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞（Compenent cells）。进入受体细胞的DNA分子通过复制，表达实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。将经过转化后的细胞在筛选培养基中培养，即可筛选出转化子（Transformant，即带有异源DNA分子的受体细胞）。目前常用的感受态细胞
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