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- xuanya
- 美国/中国
- XY-TE-0847
- 2025年11月21日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
两年
- 英文名：
DNA Phosphorylating Kit
- 库存：
900
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
人工合成的 PCR 引物、linker 和 adaptor 的 5′端一般都是-OH 基团而不是 -PO4 基团（除非额外付费要求在人工合成时加上-PO4 基团），而任何 DNA 连接酶 都不能将一个 DNA 分子 5′端的-OH 基团和另一个 DNA 分子 3′端的-OH 基团 进行连接，因此通过人工合成的 DNA 片段和天然 DNA 之间的连接效率一般都比天 然 DNA 彼此的连接效率低（天然 DNA 4 个端口均可连接，人工合成的 DNA 跟天 然 DNA 有 2 个端口可以连接，人工合成的 DNA 之间没有任何端口可以连接），尤 其是在平末端连接时。本公司开发的 DNA 磷酸化产品能将 DNA 分子 5′端的-OH 基团磷酸化。它具有下列特点：
1. 可以快速把 DNA 5′端的-OH 基团变成-PO4 基团，使人工合成的 DNA（包括 PCR 产物）跟天然 DNA 一样有高的连接效率。
2. 既可以对单链 DNA 进行磷酸化处理，也可以对双链 DNA 片段同时磷酸化处理。
3. 处理后的 DNA 可以直接用于连接反应、克隆等，不需要纯化。
4. 本产品足够 20 次 DNA 的磷酸化实验。
DNA磷酸化试剂盒运输及保存：
低温运输，-20℃保存，有效期为 6 个月。
自备试剂：引物、PCR 产物、DNA 片段
使用方法
一：双链 DNA 片段（5’端为-OH 基团的）的磷酸化注意：如果是 PCR 产物，一定要先胶回收，不能使用没经过纯化的 PCR 反应液， 因为其中的残留 PCR 引物会耗掉大量的激酶，降低 PCR 产物的磷酸化效率。
1、在微量离心管中配制下列反应液（20μL）：
2、37℃反应 30 分钟。
3、70℃热处理 5 分钟，灭活酶。
4、可直接用于后续克隆（加入量不要超过总体积的 1/5）。
DNA磷酸化试剂盒二：单链 DNA 片段的磷酸化 注：单链 DNA 包括局部双链的 DNA。引物，linker，adaptor，Oligo 探针等均按 此操作处理。
5、在微量离心管中配制下列反应液（20μL）：
6、37℃反应 30 分钟。
7、70℃热处理 5 分钟，灭活激酶。
8、可直接用于后续克隆（加入量不要超过总体积的 1/5）。如果使用浓度高，则可 能需要乙醇沉淀法浓缩 DNA。如果单链 DNA 的浓度低于 5pmol，还需要在乙 醇沉淀时加入核酸助沉剂。沉淀得到的 DNA 可溶解在适量的水中。
DNA磷酸化试剂盒附：乙醇沉淀浓度 DNA(本试剂盒不提供相关试剂，下列操作仅供参考_：
1、在 DNA 溶液中加入 0.1 倍体积的 3 M 乙酸钠溶液（pH 5.2），
2、再加入 2.5 倍体积的无水乙醇和 4uL 核酸助沉剂。
3、混匀后 12000g 4℃离心 10 分钟，小心弃上清。
4、加入 1mL 70%乙醇，短暂离心 3 分钟后小心弃上清。
5、短暂离心 5 秒，吸弃残留液体（约 30-50uL）。
6、室温放置 2 分钟干燥后加入适量的超纯水溶解 DNA，立即使用或放-20℃长期 保存。
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