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- xuanya
- 美国/中国
- XY-TE-0805
- 2025年11月21日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
两年
- 库存：
900
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
本产品是一管式反转录预混 Mix，内含反转录第一链合成所需的所有试剂 （MMLV、Random primers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、反应 Buffer 等）， 用户只需加入模板 RNA 和 RNase-Free 水即可进行反应。本产品特点如下：
1. cDNA 的合成更加方便，用户只需准备模板和水即可进行反应。
2. 快捷，操作步骤已经最大限度地简化，能减少污染，降低实验误差。
3. 效率高，特殊优化的 oligo dT 和 N6 随机引物配比，反转录效率高。
4. 速度快，只需 42℃，20 分钟即可完成 cDNA 第一链的合成。
5. 能够用于 GC 含量高，二级结构复杂的 RNA 模板，合成 cDNA 片段长度可达 12 kb。
6. 兼容性好，合成的 cDNA 可直接用于荧光定量 PCR 反应，灵敏度高、稳定性好。
动物种属鉴定PCR Mix 5运输及保存：
低温运输，-20℃保存, 有效期一年。
自备试剂：RNA 模板。
动物种属鉴定PCR Mix 5使用方法
1. 解冻后颠倒轻弹混匀各组分，以 20 uL 体系为例，按下表加入（2×RT Master Mix 很粘稠，取用前请短暂离心，并避免吸头外壁沾附损失）：
注意：对亍二级结构很复杂的 RNA 模板，推荐使用变性步骤，即在操作步骤之 前，将模板 RNA 在 65℃孵育 5 分钟后迅速转移到冰上，再进行下一步操作。
2. 轻轻混匀，42℃孵育 20 分钟进行反转录反应。
注意：对亍二级结构复杂或者 GC 含量高的模板，可以提高温度至 50℃，以增 强反转录效率。
3. 85℃加热 5 秒钟灭活反转录酶置冰上备用（更长时间保存请置于-20℃）。
动物种属鉴定PCR Mix 5注意事项
1. 实验过程中请注意避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染。
2. 使用之前请完全溶解并充分混匀，以防因盐离子浓度丌均影响实验结果。
3. 使用后应尽快放回-20℃，避免反复冻融。
4. RNA模板的完整性对cDNA合成效率起着决定性作用，因此请选择可靠的RNA提 取/纯化方法。
5. 如果扩增片段较长或者RNA结构复杂，为了加强转录效果，可以将RNA单独置于 65-70℃加热 5-10分钟后再加入体系。
6. 操作人员请带口罩和一次性手套，并经常更换手套。
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最好是四五百bp长比较合适，gRNA的targeting位点并不需要正好在PCR产物的中间。 4. 做surveyorassay时用的PCR mix我们就是用的Sigma的JumpStartReadyMix，这个是热启动的Taq酶，mix里面没有DNA染料，可以直接用于surveyor assay。 5. 分完96孔板之后大概一个星期能长出大小比较合适的单克隆，因为分细胞的时候不能保证完全均匀，有的孔里可能会长出2个或更多细胞克隆，所以需要在显微镜下把有多个克隆的孔剔除掉。我们习惯将96孔板里
inhibitor: 0.625 ul Impron Mgcl2: 1.5 ul Primer: 0.5 ul Reverse transcriptase: 0.625 ul 具 体的操作是事先计算好需要的模板量，以及所要的RNase free water的量，在PCR小管中加好需要的模板量以及RNase free water的量，并将剩下的模板立即置于-80 ℃保存。再按照反转录的体系做好总的MIX，再分装到每个PCR小管内。将PCR小管置于PCR仪上反转，反转的具体程序如下： 25 ℃
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