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- xuanya
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- XY-TE-0725
- 2025年11月06日
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温运输和保存
- 保质期：
两年
- 英文名：
DNA Shuffling Kit
- 库存：
950
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
DNAShuffling即DNA分子的体外同源重组，它是一种分子水平上的定向进化(directedevolution)技术，它以一个或多个基因为起始材料，通过先随机断裂成小片段，再进行互为模板和引物的PCR（无外加引物），最后再进行常规PCR（外加引物）等处理，最后得到含有大量DNA重组突变的PCR产物。其原理示意图如下：
DNA Shuffling试剂盒本产品就是根据上述原理优化改进而成，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板，无需单独准备各成分。
2.可以用于对长度在1000bp的同源片段进行shuffling。
3.操作手册经过优化，1-2天即可完成，节省大量优化时间。
4.本产品足够10次DNAShuffling反应，只适用于科研，不能用于临床。
DNA Shuffling试剂盒运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
自备试剂：待突变基因片段、DNAShuffling引物（第二轮PCR引物）、胶回收试剂盒。
DNA Shuffling试剂盒使用方法
1.提前开启37℃和75℃水浴或金属浴。
2.待突变基因片段的制备：待突变基因片段可以用多个含同源片段的质粒为模板、用PCR法或酶切法制备。制备时需保证含起始同源片段（或此同源片段的一部分）的DNA片段总长度要比DNAshuffling终产物（第二轮PCR产物）长200-400bp，即第二轮PCR的引物位置要在此步模板制备引物内侧100-200bp，第二轮PCR产物的长度在1000bp以下。每次DNAShuffling实验至少需要2μg起始同源片段（如果含两个以上同源片段，则彼此的比例为1:1:1），最多可以使用5μg起始同源片段，并且必须通过胶回收的方法回收，以便彻底去除残留的质粒模板、引物和非特异扩增产物等（如果不去除此步的引物，其将对后续PCR造成严重干扰）。最后需用分光光度法准确定量，此溶液即为同源片段，放冰上待用。
3.准备DNaseI工作液，将1μL本试剂盒提供的DNaseI溶液、8uL超纯水、1μLDNAShuffling试剂盒溶液A混合得DNase工作液，放冰上待用。DNase工作液必须现配现用。
4.设置同源片段碎片化反应：在一个PCR管中，按顺序加入下列成分：
5.充分轻柔吹打混匀后37℃水浴8分钟，然后立即放75℃水浴处理10分钟以灭活DNaseI。
6.在2-3%琼脂糖凝胶上电泳，用常规的胶回收法回收25-150bp范围的所有片段，分光光度法精确测定回收片段的浓度。此即为回收片段，放冰上待用。
DNA Shuffling试剂盒注意：一定要加合适的DNAmarker以便确定片段范围。
7.回收片段重组反应：在一干净PCR管中加入0.5μg回收片段、50μLPCRMix3.0、补加超纯水到100μL。反应总体积为100μL8.按下面的PCR反应参数进行第一轮无引物PCR：
9.取5-10μL进行电泳检测（本PCRMix含上样成分，可以直接上样。红色示踪剂的泳动速度相当于50bpDNA），然后对预期长度区域的PCR产物进行回收（如果Shuffling的同源区域长度为800bp，则回收600-1000bp范围的片段），得到第一轮PCR回收产物。
10.留部分第一轮PCR回收产物之后，用超纯水将其分别稀释10倍、20倍和50倍，放冰上待用。
11.取第一轮PCR回收产物原液、10倍稀释液、20倍稀释液和50倍稀释液各1uL作为PCR模板，按下表设置4管第二轮PCR反应（100μL体系）。
13.电泳检测4个PCR产物，回收预期大小的PCR产物（根据引物位置估计预期大小），用于后续克隆和分析实验（略）。
DNA Shuffling试剂盒答客问
Q：易错PCR和DNAShuffling有何区别？
A：前者引入的是点突变，后者引入的是重组突变。示意图如下：
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