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- xuanya
- 中国/美国
- XY-TE-0474
- 2025年11月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温运输和保存
- 保质期：
两年
- 英文名：
SYBR Green I, EG
- 库存：
870
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
SYBRGreenI,EG是电泳级低毒高灵敏的花青类DNA荧光染料，适用于各种核酸电泳分析。
1.低毒安全，其致突变性低于EB数倍甚至数十倍。
2.髙灵敏，SYBRGreenI与dsDNA结合，荧光信号会增强800-1000倍，至少可检出20pgDNA，灵敏度高于EB染色法10－25倍。
3.适用范围广，可适用于多种电泳分析，包括琼脂糖凝胶，聚凝胶电泳和毛细管电泳等。与xuanya的SuperBuffer-2兼容。
4.不影响其它修饰酶（Taq酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等）作用。
5.操作简单，无须脱色或冲洗。
电泳级SYBR Green I运输及保存：
低温运输，-20℃闭光保存，有效期一年。
自备试剂：电泳缓冲液（稀释用）
电泳级SYBR Green I使用方法
使用方法之一：电泳前染色
本方法是在上样时对DNA进行染色，只适于琼脂糖凝胶电泳。
1.用高纯度的无水DMSO将10000×的SYBRGreenI稀释100倍成100×电泳前染色液。染色液可以在-20℃和闭光条件下可以保存一个月以上。
2.按常规方法制备胶，胶的厚度最好不要超过5mm，胶中不能含任何染料。
3.将100X电泳前染色液与DNA样品（包括DNAMarker）按1：10的比例混合，室温放置10-15分钟，加上样液后上样。
4.上样后电泳。
5.在300nm的UV下观察。UV的功率最好为90W（15WX6），手持UV一般功率不够，难以得到满意的灵敏度。除300nm外，SYBRGreenI还可以在500nm和380nm的激发光下观察（如使用DarkReader蓝色可见光透色仪）。也可以用激光扫描仪记录电泳结果。
6.用配置了520-550nm滤光片（一般呈黄色或深黄色）的相机拍照。注意：不要使用与EB兼容的红色滤光片（能阻挡520-550nm的光）。如果能再加上能滤去UV的滤光片，效果会更好。
7.后续Southern或Northern转膜或胶回收按常规操作进行。
电泳级SYBR Green I使用方法之二：电泳中染色
本方法是将SYBRGreenI加入到琼脂糖凝胶中，优点是不需要额外的染色处理，只适于琼脂糖凝胶电泳。
1.将10000×SYBRGreenI直接加入到融化的、但温度已经降低到50℃左右的琼脂糖凝胶中，使其终浓度在0.5-1X左右，混合均匀后倒胶，厚度最好不要超过5mm。
2.按常规方法上样和电泳。
3.电泳后观察和照相处理同方法一。
注意：由于在琼脂糖凝胶中的SYBRGreenI在加热融化时会大量分解，所以琼脂糖凝胶最好需要多少配多少。
电泳级SYBR Green I使用方法之三：电泳后染色
本方法是在电泳后对DNA进行染色，适用于琼脂糖凝胶电泳和PAGE，检测灵敏度可达20pgDNA，但该方法需要单独的染色处理。
1.按照常规方法进行电泳。
2.用pH7.0-8.3的缓冲液（如：TAE，TBE或TE）将10000×SYBRGreenI稀释10000倍成1×电泳后染色液。
3.将电泳后染色液倒入合适的聚丙烯容器中，放入琼脂糖凝胶，用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10-30分钟。对聚凝胶，可取下一块玻璃板，然后将配好的电泳后染色液轻轻地倒在PAGE胶板上，让染色液均匀地覆盖整个PAGE胶板，静置染色30分钟。避免让染色液与玻璃表面接触。
4.观察和照相处理同方法一。
注意：电泳后染色液可以冷冻避光储存一个星期。反复使用次数取决于胶的大小（胶越大，非特异吸附产生的损耗就越大），一般可重复使用4次。
电泳级SYBR Green I注意事项
1.融化：本产品溶于DMSO中,融化时一定要让其彻底融化，否则SYBRGreenI在液相和固相中浓度不均，影响实验的可重复性。
2.容器：SYBRGreenI对聚丙烯材料的亲和力非特意吸附最小，故建议在稀释、贮存、染色等使用过程中使用专用的聚丙烯类容器，容器表面会被染成橙色。不要使用玻璃和非聚丙烯容器。
3.反复使用：由于凝胶和容器的非特意吸附，使用过的SYBRGreenI再染色时效率会逐渐降低。
4.稳定性：稀释后的SYBRGreenI工作液体最适保存条件是闭光、密封、低温（4℃）、pH在7.5-8.3。避免将本产品直接加入热的琼脂糖凝胶中，禁止用微波加热处理SYBRGreenI。
5.稀释液：可以用电泳缓冲液稀释SYBRGreenI，包括常用的TAE、TBE、TE、SuperBuffer-2等。最好不要使用水和pH7.8（25℃）的Tris缓冲液。后者的pH在4℃时会升高到8.4。
6.其他影响因素：染色液中最好不要有SDS，也不要用去污剂洗涤染色用的聚丙烯容器时，0.1-.3%SDS能抑制SYBRGreenI与DNA结合。用deaza-G替代G的DNA不能有效染色。
电泳级SYBR Green I疑难解答
Q：DNA条带为何出现弯曲或模糊？
A：DNA过量，将DNA用量降低到1-5ng/条带。电泳时间不要超过2小时，否则SYBRGreenI会从DNA上分离出来，会产生弥散状条带。电压不能太高，否则产热会影响SYBRGreenI与DNA的结合。
电泳级SYBR Green IQ：醇/盐沉淀法能否把结合在DNA上的SYBRGreenI去掉？
A：可以。其中乙醇效果最好，次之。但、氯仿和抽提不能去除与DNA结合的SYBRGreenI。
电泳级SYBR Green IQ：用SYBRGreenI染过的胶能否用于Southern或NorthernBlot？
A：可以，但最好在预杂交和杂交溶液中加入0.1%-0.3%的SDS。SDS能是SYBRGreenI与DNA分开。
电泳级SYBR Green IQ：能否用SYBRGreenI染色膜上的DNA。
A：可以用来染色带正电的尼龙膜上的DNA，不能用于中性尼龙膜和硝酸纤维素膜。
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REAL TIME PCR WITH SYBR GREEN I 建议PROTOCOL
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