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绿如蓝核酸染料(UV)

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  • xuanya
  • 中国/美国
  • 2025年11月01日
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    • 保存条件

      常温运输和保存

    • 保质期

      两年

    • 英文名

      DNA GREEN

    • 库存

      870

    • 供应商

      上海烜雅生物科技有限公司

    绿如蓝核酸染料(UV)产品及特点:
    目前最常见的替代EB的核酸染料SYBRGreenI(属于花类染料)虽然毒性比EB低、灵敏度比EB高,但由于其化学稳定性差(怕光、怕水、怕热),实验结果的重复性往往不尽人意;此外,SYBRGreenI在电泳过程中能在DNA分子间移位,很容易使DNA条带模糊和扭曲,电泳清晰度和分辨率也不如EB。所以在实际应用中依然不能有效替代EB。本产品是同时具有EB稳定性和SYBRGreenI低毒性的新性核酸染料,其特点如下:
    1.低毒。其主要成分未发现对人体有致癌性、未被列入有毒有害品,有利于保护使用者的健康和保护日益恶化的环境。
    2.灵敏。检测灵敏度跟EB相当,能满足常规核酸电泳实验要求。
    3.稳定。对光、水和热的稳定性跟EB相当,可加入琼脂糖凝胶中反复熔化。
    4.无分子间位移现象。不会出现SYBR染料常见的条带模糊和扭曲现象。
    5.使用方法多样。既可以加入熔化的胶中,也可以电泳后染色,还可用于PAGE。
    6.跟各种常用的核酸电泳缓冲液(如SuperBuffer-2、TBE、TAE)兼容,但在SuperBuffer-2和TBE中背景最低。
    7.观察时不需要任何额外的仪器设备或UV光源,可以使用现成的观察EB的300nmUV。
    8.可用于RNA染色(也呈绿色)。
    9.DNA或RNA浓度较高时还可以直接在日光下观察(需要将胶放在黑色背景下)。由于避免了UV对DNA的伤害,尤其适用于胶回收实验。
    产品细节图片1
    绿如蓝核酸染料(UV)运输及保存:
    常温运输,4℃保存,有效期一年。
    自备试剂:电泳缓冲液和琼脂糖凝胶

    绿如蓝核酸染料(UV)使用方法
    注意:虽然本产品的主要成分未发现对人体有致癌性、未被列入有毒有害品,但操作时最好还是戴上塑料手套。

    绿如蓝核酸染料(UV)使用方法之一:电泳中染色DNA(RNA的染色跟DNA完全一样)。本方法是将DNAGREEN直接加入溶化的凝胶中使用,只适用于琼脂糖凝胶电泳,不适用于PAGE。
    1.将DNAGREEN直接加入到融化的琼脂糖凝胶中,每100mL凝胶加3-10uLDNAGREEN,混合均匀后倒胶。琼脂糖凝胶中不能含任何其他染料(如EB和SYBRGreenI,否则会相互干扰)。在100mL琼脂糖凝胶中加入DNAGREEN的量不要超过10uL,否则背景将很强。
    注意:一定要保证琼脂糖彻底熔化,尤其是在第一次熔化胶的时候,否则未熔化的小颗粒将产生跟染料相同的荧光。
    2.将DNA样品与DNA上样液按比例混合后上样。
    注意:一定要使用不含SDS等去污剂的上样液,否则SDS会跟染料结合,极大地降低灵敏度。
    3.上样后电泳,电泳参数同常规的电泳。如果使用xuanya五分钟核酸电泳液SuperBuffer-2,需要较高电压,详见该产品使用手册。
    4.电泳结束后在300nm左右的UV下观察。
    绿如蓝核酸染料(UV)注意:不要使用波长为260nm或360nm的UV,否则检测灵敏度会降低。如果DNA或RNA浓度较高,还可以直接在日光下直接观察(需要将胶放在黑色背景下),避免UV对DNA的伤害,尤其适用于胶回收实验。
    注:显色结果:在紫外下,DNA浓度非常高的时候是白色,浓度低的时候是绿色的,单链核酸有时是红色的。
    5.用配置了520-550nm滤光片(一般呈黄色或深黄色)的相机拍照。
    注意:不要使用与EB兼容的红色滤光片(它能阻挡520-550nm的光)。如果能再加上能滤去UV的滤光片,效果会更好。
    6.后续Southern、转膜或DNA胶回收实验按常规操作进行。

    绿如蓝核酸染料(UV)使用方法之二:电泳后染色DNA本方法是在电泳后对DNA进行染色,适用于琼脂糖凝胶电泳和PAGE。但该方法需要单独的染色处理,染料用量较大,不推荐用于琼脂糖凝胶的染色。
    1.按照常规方法进行电泳。
    2.用去离子水将DNAGREEN稀释500倍后(100mL水需要加0.2mLDNAGREEN),将凝胶放入,室温下摇晃染色30分钟(对琼脂糖凝胶)或15分钟(对PAGE)。
    3.用水脱色10-30分钟,具体时间需根据背景强弱决定,其余同方法一。
    注意:电泳后染色液可以反复使用次数。

    绿如蓝核酸染料(UV)疑难解答
    Q:本产品可否用于RNA染色?
    A:可以,不论RNA是在甲醛变性胶中电泳,还是在普通的SuperBuffer-2、TBE或TAE胶中电泳,RNA染色后在300nm下都跟DNA一样呈绿色,

    Q:本产品是否可以加入上样液中进行染色?
    A:不行,本产品只能直接加入凝胶中进行染色或电泳后再染色。

    绿如蓝核酸染料(UV)Q:为何前端(靠近正极)的DNA条带很淡或根本看不见?
    A:跟EB一样,电泳时DNAGREEN朝负极方向移动,当前端的DNA(最小片段)进入没有DNAGREEN的区域时,已经结合的染料分子会逐渐从DNA分子上脱落,所以条带会变淡或根本看不见。解决办法之一是缩短电泳时间或电泳后再染色;之二是在每100mL电泳缓冲液中补加3-5uL染料。

    Q:本产品在哪种缓冲液中效果最好?
    A:DNAGREEN染料在不同缓冲液中背景荧光强度不同,从弱到强的顺序是:SuperBuffer-2、TBE、TAE。在背景较强的缓冲液体中,可以适当降低染料的用量,比如100mL胶中加3-5uL。最佳浓度需要稍做摸索。

    Q:为何电泳后前面部分(靠近正极)的胶呈白色,后面的胶呈黑色?
    A:DNAGREEN染料带正电,电泳时往上走,胶的黑色部分是染料上移后留下的无染料胶。本产品在TAE中背景最强,可参考上个问题答案更换电泳液以降低背景值。

    绿如蓝核酸染料(UV)Q:用SYBR染色的DNA在电泳时为何容易发生条带模糊和扭曲现象?
    A:SYBR染料一般与DNA的小沟结合,但在常规电泳条件下该结合并不牢固,染料分子可以在标记的和未标记的DNA分子之间转移,使DNA分子的泳动速度时快(无染料结合时)时慢(有染料结合时),发生条带模糊和扭曲现象。嵌入型染料(如EB和本产品)与DNA结合牢固,则无此现象。

    Q:核酸染料是否都有毒性?
    A:核酸染料对动物和人的毒性由多方面决定。一是染料的膜通透性,EB被归类为强诱变剂是由于其分子量较小,容易进入细胞内。而EB二聚体EthidiumHomodimer(EthD)嵌入DNA的能力比EB强上千倍,但毒性很小,就是由于其分子比EB大,不能透过细胞膜,所以毒性反而更低。SYBR系列染料虽然低毒,但由于一般都溶于DMSO(因为容易水解,不能使用水溶液做溶剂)中,所以如果溅到皮肤表面,更容易进入皮肤。二是染料是否容易被人体降解。比如EB在体外就很难降解,一旦进入体内能在人体内残留的时间可能比较长,增加了毒性;而SYBRGreenI等染料(也能以嵌入方式与DNA结合)由于不稳定,比较容易自然降解,所以毒性自然较低。三是降解产物是否有毒性,比如用很多方法(如强碱法)降解EB得到的产物有的比EB毒性更大,而有的染料降解产物毒性却低很多,甚至无毒。四是染料进入细胞核以后是否能跟DNA结合,很多实验结果显示即使EB染料也很难嵌入型到染色体中,因为染色体中的DNA已经紧密地与各种组蛋白结合。五是细胞修复突变的能力,正常人体都有很强的修复突变的能力,如修复日光中UV诱导的DNA突变。总之,一种DNA染料的毒性强弱是多种因素综合的结果。

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