一步法96孔板质粒DNAout(离心法)

一步法96孔板质粒DNAout(离心法)

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  • ¥100 - 2000
  • xuanya
  • 中国/美国
  • XY-TE-0352
  • 2025年10月14日
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    • 详细信息
    • 技术资料
    • 保存条件

      常温运输和保存

    • 保质期

      两年

    • 英文名

      One-Step Max Plasmind DNAout

    • 库存

      860

    • 供应商

      上海烜雅生物科技有限公司

    一步法96孔板质粒DNAout(离心法)产品及特点:
    本产品是在xuanya一步法质粒DNAOUT2.0基础上开发的、能够快速从100mL左右的E.coli培养液中取质粒DNA的产品。它只需要一种溶液即可以完成细菌裂解,并且裂解物可以直接上柱纯化质粒DNA。它比经典的碱变性质粒制备方法更加快捷和方便。本产品的主要特点是:
    1.快速,整个质粒DNA提取过程只需要不到30分钟,比传统的碱变性方法快捷。
    2.超螺旋比例高,独创的非碱法一步式细菌裂解技术,避免了强碱对DNA的损害,得到的质粒DNA切口更少。
    3.DNA纯度高,几乎没有基因组DNA和RNA污染,OD260/280一般在1.7-1.9之间。
    4.DNA可以直接用于电泳、酶切、PCR、细菌转化、分子克隆等实验。
    5.最大吸附量为600ugDNA,具体产率取决于质粒拷贝数。
    6.过程简单,重复性和稳定性好。
    一步法96孔板质粒DNAout(离心法)
    一步法96孔板质粒DNAout(离心法)运输及保存:
    常温运输及保存(溶液A需要4℃保存),有效期一年。
    自备试剂:无

    一步法96孔板质粒DNAout(离心法)使用方法
    1.用50mL离心管分数次收集10-60mL新鲜的菌液,一般可以5000rpm离心10分钟,去除上清即得细菌沉淀。
    2.往细菌沉淀中加入14mL溶液A,充分振荡悬浮或吹打混匀。注意:充分重悬细胞沉淀(无块状物)对于获得高的质粒产量十分重要。
    3.将裂解液全部转移到大离心吸附柱中,放入到配套的收集管中。
    4.6000rpm离心5-10分钟,弃穿透液。离心过滤柱将吸附溶液中的质粒DNA,而将基因组DNA和杂质在穿透液中。如果离心吸附柱中还有未离心下去的裂解液,可以适当延长离心时间直到离心吸附柱中没有残留液体。
    5.将10mL通用预洗液加入到离心吸附柱中,室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟,弃穿透液。
    6.重复上步一次。
    7.将10mL通用洗柱液加入到离心吸附柱中,室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟,弃穿透液。
    8.重复上步一次。
    9.室温6000rpm空甩5分钟,弃穿透液。注意:此步很重要,不能跳过。
    10.将离心吸附柱放入一个自备的、干净的50mL塑料离心管中,加1mL通用洗脱液(洗脱液如加热到50-65℃效果更佳),室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟,收集液即是质粒DNA溶液。
    11.重复上步1次以便洗脱更多的质粒DNA。
    12.合并所得质粒DNA,立即使用或-20℃储存。

    一步法96孔板质粒DNAout(离心法)注意事项
    1.细菌培养时间一般为12-16小时,但接种量大时应减少时间。过度培养会降低质粒的质量甚至导致质粒DNA突变。
    2.菌体过多会造成裂解液粘稠透,需要充分吹打,否则容易堵塞离心柱。
    3.通用洗柱液洗涤离心柱后必须甩干一次,否则残留通用洗柱液中的乙醇会干扰后续实验。
    4.质粒的具体产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。一般1.5mL过夜培养菌体可收获约10ug高拷贝质粒。
    5.从生长旺盛的细菌中纯化的质粒在电泳中表现为2-3条带有时甚至为4-6条带均属正常,它们就是还未来得及分开的相套的质粒,易被误判为基因组DNA。

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