- ￥100 - 2000
- xuanya
- 中国/美国
- XY-TE-0352
- 2025年10月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温运输和保存
- 保质期：
两年
- 英文名：
One-Step Max Plasmind DNAout
- 库存：
860
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
本产品是在xuanya一步法质粒DNAOUT2.0基础上开发的、能够快速从100mL左右的E.coli培养液中取质粒DNA的产品。它只需要一种溶液即可以完成细菌裂解，并且裂解物可以直接上柱纯化质粒DNA。它比经典的碱变性质粒制备方法更加快捷和方便。本产品的主要特点是：
1.快速，整个质粒DNA提取过程只需要不到30分钟，比传统的碱变性方法快捷。
2.超螺旋比例高，独创的非碱法一步式细菌裂解技术，避免了强碱对DNA的损害，得到的质粒DNA切口更少。
3.DNA纯度高，几乎没有基因组DNA和RNA污染，OD260/280一般在1.7-1.9之间。
4.DNA可以直接用于电泳、酶切、PCR、细菌转化、分子克隆等实验。
5.最大吸附量为600ugDNA，具体产率取决于质粒拷贝数。
6.过程简单，重复性和稳定性好。
一步法96孔板质粒DNAout(离心法)运输及保存：
常温运输及保存（溶液A需要4℃保存），有效期一年。
自备试剂：无
一步法96孔板质粒DNAout(离心法)使用方法
1.用50mL离心管分数次收集10-60mL新鲜的菌液，一般可以5000rpm离心10分钟，去除上清即得细菌沉淀。
2.往细菌沉淀中加入14mL溶液A，充分振荡悬浮或吹打混匀。注意：充分重悬细胞沉淀（无块状物）对于获得高的质粒产量十分重要。
3.将裂解液全部转移到大离心吸附柱中，放入到配套的收集管中。
4.6000rpm离心5-10分钟，弃穿透液。离心过滤柱将吸附溶液中的质粒DNA，而将基因组DNA和杂质在穿透液中。如果离心吸附柱中还有未离心下去的裂解液，可以适当延长离心时间直到离心吸附柱中没有残留液体。
5.将10mL通用预洗液加入到离心吸附柱中，室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟，弃穿透液。
6.重复上步一次。
7.将10mL通用洗柱液加入到离心吸附柱中，室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟，弃穿透液。
8.重复上步一次。
9.室温6000rpm空甩5分钟，弃穿透液。注意：此步很重要，不能跳过。
10.将离心吸附柱放入一个自备的、干净的50mL塑料离心管中，加1mL通用洗脱液（洗脱液如加热到50-65℃效果更佳），室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟，收集液即是质粒DNA溶液。
11.重复上步1次以便洗脱更多的质粒DNA。
12.合并所得质粒DNA，立即使用或-20℃储存。
一步法96孔板质粒DNAout(离心法)注意事项
1．细菌培养时间一般为12-16小时，但接种量大时应减少时间。过度培养会降低质粒的质量甚至导致质粒DNA突变。
2．菌体过多会造成裂解液粘稠透，需要充分吹打，否则容易堵塞离心柱。
3．通用洗柱液洗涤离心柱后必须甩干一次，否则残留通用洗柱液中的乙醇会干扰后续实验。
4．质粒的具体产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。一般1.5mL过夜培养菌体可收获约10ug高拷贝质粒。
5．从生长旺盛的细菌中纯化的质粒在电泳中表现为2-3条带有时甚至为4-6条带均属正常，它们就是还未来得及分开的相套的质粒，易被误判为基因组DNA。
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文献和实验一步法提取质粒DNA主要用于鉴定阳性克隆。 主要步骤如下： 收集1.5mL菌体，彻底除去培养基； 加入50ulSTE缓冲液重悬菌体； 加入50ul酚：氯仿;异戊醇（25：24：1），混匀； 12000rpm离心5分钟，取上清到另一离心管中； 加入NH4Ac至终浓度2M，并加入2倍体积的乙醇，混匀，室温或冰上放置几分钟； 12000rpm离心5分钟，弃上清，75%乙醇清沉淀； 沉淀干后，以水或TE缓冲液溶解，便
体可通过传递信息影响目标细胞的功能，激活细胞信号通路，在免疫、凝血、肿瘤等生理病理过程中发挥作用。外泌体可以作为临床诊断中的生物标志物或疾病治疗的靶点，同时也可以作为药物载体，参与神经疾病和癌症等多种疾病的病理过程。 三、关键步骤 — 外泌体分离 外泌体的分离纯度对外泌体的功能研究非常重要，但是外泌体的分离一直是困扰外泌体研究人员的一个难题。虽然分离外泌体方法有很多种，包括差速超速离心法（超离法）、超滤法、密度梯度离心法、免疫磁珠法、试剂盒法等。 但目前
良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。 慢病毒转染优点：1.外源基因表达水平较高、表达稳定；2.转染效率高，可感染分裂和不分裂的细胞，几乎可以感染所有类型的细胞，特别适合质粒载体转染效率低的细胞；3.慢病毒基因容易操作，易于制备大量病毒且滴度高；4.病毒基因组可整合到细胞基因组，易于构建稳定细胞株。 慢病毒包装技术：慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。将外源基因克隆进入表达载体，同时与包装质粒（表达病毒包装所需辅助蛋白）一起转染
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