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- xuanya
- 中国/美国
- XY-TE-0291
- 2025年10月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温运输和保存
- 保质期：
两年
- 英文名：
Glassbeads Large-Scale Column Fungal DNAout
- 库存：
860
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
本产品在xuanya柱式真菌DNAout基础上改良而得的大提升级产品，主要用于大量快速从各种真菌材料中提取基因组DNA。跟柱式真菌DNAout相比，它具有下列特点：
1.处理量大，一次可以处理1-3g各种真菌组织。
2.纯度高，OD260/280一般在1.8以上。不含污染和抑制剂，得到的DNA可以不经稀释直接用于酶切、PCR、real-timePCR、multiplexPCR、RAPD、RELP、AFLP、SouthernBlotting，microsatelliteanalysis等各种后续分子生物学实验。
3.采用玻璃珠法破碎细胞，属于物理方法，远比基于蜗牛酶或破壁酶的温和化学破壁法重复性好，也不容易带入外援真菌DNA（注：文献报道蜗牛酶或破壁酶中常常有外源真菌DNA污染，用于提取真菌DNA往往会造成污染。这些文献可从本公司本产品介绍网页下方下载）。
4.产率一般在10-100ug/g真菌样品。离心吸附柱最大吸附量为800ug。
5.DNA片段长度一般在20-40kb左右。
6.适用范围广，适用于度大多数真菌材料，包括酵母（S.cerevisiae、S.pomb、Pichiapastoris）等。
大提柱式酵母DNAout运输及保存：
常温运输,4℃保存，有效期一年。
自备试剂：无。
大提柱式酵母DNAout使用方法
1.对菌液：取60-100mL过夜培养的真菌菌液(OD600一般在1以上)到干净的塑料离心管中，12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
2.对菌落：用接种针在在培养基上刮取尽可能多的真菌菌落（约1g），转移到装有20mL无菌水的干净的塑料离心管中，洗涤下接种环上的菌体。12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
3.对孢子材料，一般取1-3g左右，直接加入到离心管中，在材料中加入无菌水20mL，振荡半分钟后12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
4.沉淀中加入10mL溶液A和10克的玻璃珠，涡旋震荡10分钟，可以延长震荡时间。
5.加入10mL的溶液B，涡旋震荡5分钟，12000rpm离心2分钟，将上清液全部转移到一个50mL的干净的塑料离心管中。
6.在上清中加入3倍体积的溶液C，颠倒数次混匀后，分三次上离心吸附柱，每次上柱后均先室温放置2分钟，然后12000rpm离心1分钟，倒掉穿透液，再第二次上柱，重复上面的操作，直到挂柱步骤完成。
7.将20mL通用洗柱液加入离心柱，12000rpm离心1分钟，弃穿透液。
8.重复上步操作一次。
9.12000rpm空甩1分钟去除残留液体。
10.将离心柱放置在一新的50mL塑料离心管中，加入500uLDNA洗脱液2.0。
11.室温放置5分钟后12000rpm离心1分钟，管底即为真菌DNA样品，吸取离心管中的DNA溶液重新滴加在吸附柱上，离心洗脱以收集更多的DNA。
12.所得DNA可立即使用，也可长期保存在－20℃。
13.注：如离心机转速不能达到12000rpm，可以用最大转速离心10-15min代替12000rpm离心1-2min。
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文献和实验2, 其它稳定剂和增强剂 三DNA提取相关产品 1.柱式小量质粒DNA抽提纯化试剂盒：MTL001-1 50次 79元 2.DNA胶回收试剂盒： MTL002-1 50次 89元 3.动物DNAout（动物DNA提取试剂盒）：3670-10 10 ml 90元 4.植物DNAout（植物DNA提取试剂盒）：3672-10 10次 90元 5.血液DNAout(血液DNA提取试剂盒)： 3671-10 10 次 90元 6.革氏阴性细菌DNAout提取试剂盒： 3673-10 10 次 90元
等。 PCR 产物 两种方式：一种纯化后直接酶切连接；一种连 T 载体再往下切连接。我个人强烈建议第二种，连 T 载体。因为 PCR 产物直接酶切我觉得有两个缺点：①由于两头把手太短，虽说有保护碱基，但我觉得还是不如从质粒上往下切好切，而且容易切坏、切碎；②无法从电泳上看出来切没切开，因为也就切下了几个十几个 bp，带形没啥变化。连 T 载体的优点：①进载体后，大提一次的质粒夸张点说够用一辈子的，再说 PCR 那东西还不太稳定，一把多一把少的。②酶切会很清晰，切下来了就是有带，没切动
分培养的细胞可 以置于细胞裂解液中，通过简单的涡旋震荡来匀浆；而动物组织、植物组织、酵母和细菌、真菌则常常需要更加剧烈的方法，通常用液氮研磨。比如说细菌（特别是 革兰氏阳性菌）的细胞壁，就需要溶菌酶消化来实现彻底的细胞裂解和RNA的最大回收。酵母和革兰氏阳性菌通常还需要液氮研磨过程中加入玻璃微珠帮助破壁， 酵母提取也可以加入诸如Lyticase等破壁酶帮助破壁，再用TRIpure或RNApure进行提取。4.选择最好的RNA分离方法现有众多的RNA分离方法也许令人难以取舍。目前最简单也是最安全的方法
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