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- xuanya
- 中国/美国
- XY-TE-0350
- 2025年11月01日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温运输和保存
- 保质期：
两年
- 英文名：
One-Step Endo-free Plasmid DNAOUT
- 库存：
860
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
本产品是在xuanya一步式质粒DNAout2.0和液相内毒素清除剂两产品的基础上开发出来的无内毒素质粒DNA提取试剂。用本产品提取的质粒DNA，内毒素的污染浓度低，适合于转染等对内毒素的污染敏感的实验。此产品的特点是：
1.在提取质粒前去除内毒素(存在于细菌表面)，从源头上避免料内毒素和质粒DNA接触，从根本上防止了内毒素对质粒DNA的污染。
2.独创的一步法质粒DNA提取技术，操作快捷，只需要5-10分钟。
3.质粒回收率高，一次处理后90%的质粒DNA可以回收回来。
4.得到的质粒DNA可以直接用于转染等实验。
一步法无内毒素质粒DNAout运输及保存：
常温运输及保存(溶液A最好4℃保存)，有效期一年。
自备试剂：无
一步法无内毒素质粒DNAout使用方法
一:菌体内毒素的清除
1.收集1.5-3mLE.coli饱和菌液，12000rpm离心1分钟，弃上清，得到细菌沉淀。
2.在沉淀中加入1mL菌体内毒素清除剂，温和混匀后10000-12000rpm离心1分钟，弃上清（含内毒素）。
3.再重复上述操作3次，得到的菌体沉淀可以直接进入下面的一步法质粒DNA提取操作。
一步法无内毒素质粒DNAout二：一步法质粒DNA提取
4.在菌体沉淀中加入0.6mL溶液A(用前需摇匀)，充分吹打或振荡30秒裂解细菌，直到裂解液变澄清（一般需要半分钟左右）。注:此方法丌同于碱裂解法，故可以充分吹打或振荡。
5.活化离心吸附柱：在离心吸附柱中加入0.5mL吸附柱活化液，套上收集管后室温放置2分钟，然后12,000rpm离心2分钟，倒弃穿透液，再将吸附柱套上收集管后待用。活化后的离心吸附柱必须立即使用。如果丌活化，质粒得率将低20-40%左右。
6.将第4步得到的裂解液全部转移到离心吸附柱中，室温静置2分钟使质粒DNA不膜结合。
一步法无内毒素质粒DNAout注意：必须静止2分钟，否则质粒DNA丌容易吸附上。
7.室温12000-15000g离心半分钟，弃穿透液。
8.在离心吸附柱中加入0.6mL的通用预洗液(注意:是通用预洗液，丌是通用洗柱液，丌要用错。通用预洗液非常容易产生沉淀，用前需要加热到60℃左右使之融化，混匀后再用)，室温12000-15000g离心半分钟，弃穿透液。
9.在离心吸附柱中加入0.6mL的通用洗柱液，室温12000-15000g离心半分钟，弃穿透液。
10.在离心吸附柱中加入0.4mL的通用洗柱液，室温12000-15000g离心半分钟，弃穿透液。
11.室温12000-15000g离心半分钟，甩干残留液体。
12.将离心柱置于一个新的1.5mL自备塑料离心管中，加入30-100uLDNA洗脱液2.0，室温放置2分钟。
13.12000-15000g离心半分钟，离心管底溶液即无内毒素质粒DNA。
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CRISPR/Cas9 基因敲除实验-- sgRNA 及引物设计
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