革兰氏阳性菌基因组DNA提取试剂盒

特别提示：包括革兰氏阳性菌基因组DNA提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：革兰氏阳性菌基因组DNA提取试剂盒
英文名称：Genomic DNA extraction kit for Gram-positive bacteria
产品货号：QN2052
产品规格：50T|100T

本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取革兰氏阳性菌基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，能够高效专一吸附DNA，可zuì大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、 PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

试剂盒组成：

组分	D1650-50T	D1650-100T
溶菌酶	3ml	5.5ml
RNase A	1m1	1m1×2
蛋白酶K	1ml	1m1×2
溶液A	10ml	20ml
溶液B	10ml	20ml
漂洗液	15m1	15ml×2
洗脱液	15m1	30m1
吸附柱	50个	100个
收集管	50个	100个
说明书	1份	1份

储存条件：15～25℃干燥保存，有效期12个月，2℃-8℃保存时间更长。

操作步骤：
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1．取细菌培养液1ml，12000rpm 离心1min.，尽量吸除上清。
2．向菌体中加入200μl终浓度为20mg/ml的溶菌酶，用溶菌酶干粉加入缓冲液20mM Tris(pH8.0)；2mM Na2-EDTA；1.2% Triton X-100，37℃处理30min以上。(如果需要去除RNA，可加入20μl RNase A,100mg/ml溶液)
3．向菌体中加入200μl溶液A，振荡或用移液器吹打使菌体充分悬浮，向悬浮液中加入20μl的RNase A(10mg/ml)和50ul溶菌酶，充分颠倒混匀，室温放置30～60min。(可选作，如做第3步操作，可以将第2步离心后的沉淀用于后续实验)。
4．向管中加入20μl的蛋白酶K(10mg/ml)，充分混匀，55℃消化30～60min，消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化完全为止，此时可见菌液呈清亮粘稠状。
5．向管中加入200μl溶液B，充分颠倒混匀，如出现白色沉淀，可于75℃放置15～30min，沉淀即会消失，不影响后续实验。如果溶液未变清亮，说明样品消化不彻底，可能会导致 DNA的提取量以及纯度降低，还可能堵塞吸附柱。
6．向管中加入200μl无水乙醇，充分混匀，此时还可能会出现絮状沉淀，不影响DNA的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入到吸附柱中，静置2min。
7．12000rpm离心2min. 弃废液，将吸附柱放入收集管中。
8．向吸附柱中加入600μl漂洗液(使用前请先检查是否己加入无水乙醇)。12000rpm 离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
9．向吸附柱中加入600μl漂洗液，12000rpm离心lmin，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
10．12000rpm离心2min，将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验如酶切、PCR等。
11．将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加 50～200μl经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，12000rpm离心1min。
12．离心所得洗脱液再加入吸附柱中，室温放置2min，12000rpm 离心2min，即可得到高质量的细菌基因组DNA。

注意事项:
1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
2．若试剂盒中的溶液出现沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响提取效果。
3．如果实验中的离心步骤出现柱子堵塞的情况，可适当延长离心时间。
4．洗脱缓冲液的体积zuì好不少于50μl，体积过小会影响回收效率；洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。
5．DNA浓度及纯度检测：得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1.0相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。OD260/0D280比值应为1.7～1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

除了革兰氏阳性菌基因组DNA提取试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：非冻型血液DNA保存液
货号：BTN60910
规格：250mL
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。

产品特点：
1. 保存时间长，可常温保存血液DNA 长达六个月，尤其适合于野外血液样品采集。
2. DNA 完整性好，纯化后长度在20-50 Kb之间。
3. DNA 无化学修饰，提得的DNA可用于酶切、电泳、Southern杂交和PCR等分子生物学实验。
4.适用于各种动物血液(包括禽类血液)。
5. 安全可靠，本产品无毒无害。
6. 使用简单，直接把新鲜的血液样品与本产品混合即可。

储存条件：室温运输及保存，有效期两年。

使用方法：

一: 哺乳动物血液(包括人血液)
1. 将抗凝血(1-10mL)加入到适当容量的塑料离心管中。
2. 加入等体积的血液DNAhold，充分振荡混合均匀。
3. 常温闭光保存直到使用。
4. 提取DNA时，可以取出部分液体，用自备的蛋白酶K(终浓度为0.1mg/mL)37℃处理过夜，然后再用经典的酚/lǜ仿抽提+乙醇沉淀方法得到DNA。

二: 禽类血液
由于禽类血液有核细胞量远高于哺乳动物，血液的使用量很少，一般只有哺乳动物血液用量的1/100 到1/1000，所以需先用等体积的水将血液DNAhold稀释，然后直接将禽类血液加入。其余操作同上。

名称：一步式复杂样品DNA提取试剂盒
货号：BTN61202
规格：10mL
本试剂盒是专用于从各种常见的样品中快速提取用于PCR扩增的DNA。

试剂盒特点：
1.操作简单，只用一步(约5-10分钟)即可以得到用于PCR扩增的DNA 模板，不需要任何离心、抽提等操作步骤，比常用的Chelex100提取方法和*酚/lǜ仿方法快。
2.兼容性广，可以用于几乎所有的分子生物学样品，包括细菌、昆虫、真菌、各种植物、各种动物、法医样品(包括全血液、血痕、精斑、唾液、毛发、组织样品、口腔细胞和FTA卡)、石蜡组织切片等。
3.环保健康，不使用任何有毒有害的试剂。
4.尤其适用于大规模育种筛选和临床筛选。

试剂盒组成：

成分	规格
一步式广谱DNA提取试剂	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
1. 将约2μl液体样品(如全血、细胞培养液)或2mg的固体样品(如动物组织，约半粒芝麻大小)加入到50μl 本产品中。
注意：样品加入量可能需要根据其DNA的含量稍做调节，如果样品DNA含量少，则用量要增加，但总液体样品用量zuì好不要超过本产品用量的1/10；固体样品用量zuì好不要超过1mg/10μl的比例。下面是部分常见生物样品的DNA含量：

材料	DNA含量
精液	150-300μg/mL
血液	20-40μg/mL
精斑	20-30μg/cm2
唾液	1-10μg/mL
血斑	250-500 ng/cm2
口腔拭子	100-1500 ng/拭子
组织	50-500 ng/mg
阴道拭子	10-3000 ng/拭子
骨头	3-10 ng/mg
拔出的带发根头发	1-750 ng/发根
尿液	1-20 ng/mL
自然脱落的带发根头发	1-10 ng/发根

2. 80℃加热5分钟后。
注意：此步的条件可以根据样品的质地稍做调节。如果是液体样品，室温处理1-3分钟即可。如果是难以破裂的细胞和材料(如酵母、石蜡组织切片、血斑)，则保温时间可以延长到10-30分钟。
3. 简短振荡混匀后取裂解物直接进行PCR(裂解物体积zuì好不要超过PCR 体积的1/10)。
4.其余同常规操作。

疑难解答：
Q： 本产品与美国BioVenture的GeneReleaser 有何区别？
A： 本产品处理简单，只需要80℃加热5分钟即可；而GeneReleaser 加热处理复杂而繁琐，共需要9 步处理，累计时间需要10 余分钟量(具体是65℃ 30s，8℃ 30s，65℃ 90s，97℃ 180s，8℃ 60s，65℃ 180s，97℃ 60s，65℃ 60s，80℃放置)，手工操作时十分难以控制。
Q： 用本产品提取的DNA 能否用电泳方法检测？
A： 由于DNA含量太少，不能用电泳方法检测。