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- 2025年07月16日
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大量
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12个月
- 供应商：
正旦国际
- 英文名：
His-Tagged Protein Purification Kit
- 保存条件：
4℃
- 规格：
4ml
His标签融合蛋白纯化试剂盒
规格：4ml
该产品由军事医学科学院研发监制
一、原理
含有多聚组氨酸的蛋白质或多肽可以与Ni2+螯合物结合，用适当的缓冲液冲洗去除杂蛋白后，再用可溶性竞争性螯合剂咪唑洗脱回收含有多聚组氨酸的靶蛋白。
二、试剂
1. 层析柱 1根
2. Ni2+螯合琼脂糖凝胶4B 4ml或10ml
3. 硫酸镍 5g或10g
4. 咪唑 6g或12g
5. EDTA 10g或20g
三、纯化方法
1．取2ml或5ml Ni2+螯合琼脂糖凝胶4B装柱，凝胶自然沉降。
2．用5倍柱床体积的水洗层析柱，再用5倍柱床体积的结合缓冲液（20mmol/L磷酸盐缓冲液,500mmol/L NaCl,pH 7.8）平衡层析凝胶柱。
3. 将适量细胞裂解液（20mmol/L磷酸盐缓冲液,500mmol/L NaCl,pH 7.8）12000g离心，取上清，上样，流速为0.1ml/min。
4．用5-10倍柱床体积的结合缓冲液洗层析柱，流速0.1ml/min。
5．分别用含不同浓度咪唑的洗脱缓冲液进行分段洗脱，流速0.1ml/min，收集各洗脱峰。（咪唑的浓度一般为10、20、50、100、150、200mmol/L，依据不同融合蛋白而不同）。
6．SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析组氨酸标签融合蛋白纯度。
四、再生
1．用2倍柱床体积的0.2mol/L乙酸洗层析柱，再用5倍柱床体积的水洗层析柱。
2．用5倍柱床体积50％乙醇层析柱，再用5倍柱床体积的水洗层析柱。
3．用5倍柱床体积的0.1mol/L EDTA洗层析柱，再用5倍柱床体积的水洗层析柱。
4．用2倍体积的0.1mol/L 硫酸镍洗层析柱，再用5倍柱床体积的水洗层析柱。
五、保存
在20%乙醇中，4℃下保存一年。
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