高纯度质粒微量提取试剂盒

特别提示：包括高纯度质粒微量提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：高纯度质粒微量提取试剂盒
英文名称：High Purity Plasmid micro Extraction Kit
产品货号：WH0037
产品规格：50次

本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，高效、专一吸附DNA。由于增加了过滤柱，与普通的提取方法相比，本试剂盒可zuì大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物，适用于提取1-5ml过夜培养的大肠杆菌，质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件，细胞的裂解，质粒拷贝数，质粒的稳定性，抗生素等因素有关。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于转染多种细胞及各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接等实验。

产品特点：
·高纯度：提取的质粒DNA可直接用于转染等高要求实验。
·快速：步骤少，操作简单，节省时间。
·高效：可提取菌体85%以上质粒DNA。

质粒得率：

质粒类型	处理量	得率	质粒
高拷贝质粒	1-5ml	6-30μg	pTZ,pUC,pBS,pTG-T
低拷贝质粒	1-5ml	3-12μg	pBR322,pACYC及其衍生载体pSC101 及其衍生载体，SuperCos,pWE15

试剂盒组成：

组分	50T
平衡液BL	30ml
溶液P1	15ml
溶液P2	15ml
溶液P3	20ml
去蛋白液PD	30ml
漂洗液PW	15ml
洗脱缓冲液TB	15ml
RNaseA（10mg/ml)	150μl
过滤柱CS	50个
吸附柱CP3	50个
收集管（2ml)	100个

保存条件：室温（15-25℃)干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。第一次使用前将RNase A加入溶液P1中，混匀后置于2-8℃保存，可稳定保存12个月以上。单独包装的RNase A在室温可稳定保存12个月以上。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．溶液P1在使用前先加入RNase A（将试剂盒中提供的RNase A全部加入），混匀，置于2-8℃保存。
2．使用前先检查平衡液BL、溶液P2和P3是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
3．注意不要直接接触溶液P2和P3，使用后应立即盖紧盖子。
4．所有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心，速度为12000rpm （~13400×g)。
5．提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。
6．实验前使用平衡液处理吸附柱，可以zuì大限度激活硅基质膜，提高得率。
7．用平衡液处理过的柱子zuì好当天使用，放置时间过长会影响效果。

使用方法：
使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1．柱平衡步骤：向吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中）加入500μl的平衡液BL，12000rpm（~13400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）
2．取1-5ml过夜培养的菌液加入离心管中，12000rpm （~13400×g )离心1 min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
3．向留有菌体沉淀的离心管中加入250 μl溶液P1 （请先检查是否已加入RNase A），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
  注意：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
4．向离心管中加入250 μl溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
  注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片断。此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5 min，以免质粒受到破坏。如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
5.向离心管中加入350 μl溶液P3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。12000rpm （~13400×g )离心10min，用移液器小心地将上清转移到过滤柱CS（过滤柱放入收集管中），注意尽量不要吸出沉淀。
  注意：P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
6．12000rpm （~13400×g )离心2 min，小心地将离心后收集管中得到的溶液转移到吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中），（如果过滤柱中有残余的液体说明步骤5吸取的上清中杂质过多，可以延长离心的时间；如果离心后收集管底部有少量的沉淀，尽量的吸取上清）。
7．12000rpm （~13400×g )离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中。
8．向吸附柱CP3中加入500μl去蛋白液PD，12000rpm （~13400×g )离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中。
9．向吸附柱CP3中加入600 μl漂洗液PW（请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400×g )离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中。
10．重复操作步骤9。
11．将吸附柱CP3放入收集管中，12000rpm （~13400×g )离心2 min，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。
  注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱CP3开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
12．将吸附柱CP3置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-100 μl洗脱缓冲液TB，室温放置2 min，12000rpm （~13400×g )离心2 min，将质粒溶液收集到离心管中。
  注意：为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，重复步骤12。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。洗脱缓冲液体积不应少于50 μl，体积过小影响回收效率。且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

低拷贝或大质粒（>10 kb）提取：
如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒，应加大菌体使用量，使用5-10 ml过夜培养物，同时按照比例增加P1、P2、P3的用量，洗脱缓冲液TB应在65-70℃水浴预热，在吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率。其它步骤相同。

除了高纯度质粒微量提取试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：


BTN121001 血液游离DNA提取试剂盒(液体样品DNA提取试剂盒) 50次
WE0174 新型植物基因组DNA提取试剂盒 50次|200次
WE0400 口腔拭子DNA样本保存管 200μl×20支
ALH125 组织细胞基因组DNA提取试剂盒 50次|100次|200次
ALH172 病毒DNA提取试剂盒 50次
QN0892 全血基因组DNA提取系统(沉淀法) 50T|200T
QN0902 革兰氏阳性菌质粒小量提取试剂盒 50T|100T
QN0908 核酸提取试剂 250ml
CZ001 磁珠法血液DNA提取试剂盒 100次
CZ004 磁珠法粪便DNA提取试剂盒 20次/100次
MT0044 细胞基因组DNA提取试剂盒(20分钟) 50T
MT0050 血液微量DNA提取试剂盒 50T
QN2053 磁珠法动物基因组DNA提取试剂盒(心、肝、肌) 50T
WH0017 口腔拭子基因组DNA提取试剂盒（离心吸附柱法) 50次|200次
WH0215 高效拭子基因组DNA提取试剂盒（离心吸附柱法) 50次|200次
WH0019 粪便基因组DNA提取试剂盒（离心吸附柱法) 50次
WH0025 新型植物基因DNA组提取试剂盒（离心吸附柱法) 50次|200次
WH0116 游离核酸大量提取试剂盒（磁珠法) 2ml×50次|2ml×200次|2ml×1000次