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文献和实验呀,当然如果时间够长的话! wscoco78 :嗯,上次我是选择性抽提的小片段,用的0.8%,是好像条带清晰一些,不过1.5%我也跑出来过,我当时还用到了100bp的marker,所以才用了1.5%,chujun可以综合考虑,那就0.8%~1.5%吧。midas: 自己的实际经验比任何教课书都管用。 brainchip :你们在做LADDER,收集贴壁细胞时,用的是什么方法收集的细胞,胰酶消化么?有没有更好的方法,因为有人说胰酶对已发生调亡的细胞的细胞壁有损害,可以减少凋亡的细胞 数量,是不是真有此事
发生细胞凋亡时,内源性核酸酶被激活,染色体DNA链在核小体之间被切割,形成180~200个碱基或其整数倍的DNA片段,将这些DNA片段抽提出来进行电泳,可得到DNA梯状条带(DNA ladder)。 一、材料与试剂 凋亡细胞; 蛋白酶K(500μg/ml) 8mol/L 醋酸钾 白细胞裂解液:pH8.0,10mmol/L Tris-HCl,10mmol/L NaCl,10mmol/L EDTA,1% SDS。 氯仿 无水乙醇,70%乙醇; 2%琼脂
EDTA) for 10 minutes at 100 V. 2) To 3 μg (3 μl) of ladder, add loading buffer (recommended final loading buffer concentration is 20 mM MOPS; pH 7.0, 6% w/v formaldehyde, 31% v/v deionized formamide, 1 mM EDTA, 0.0125% xylene cyanol
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