病毒核酸提取试剂盒（磁珠法)

特别提示：包括病毒核酸提取试剂盒（磁珠法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：病毒核酸提取试剂盒（磁珠法)
英文名称：Magnetic Animal Tissue Genomic DNA Extraction Kit
产品货号：WH0122
产品规格：50次|96次

本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统，从血清、血浆、拭子、组织处理液等样本中分离纯化高质量病毒DNA/RNA。独特包埋的磁珠，在一定条件下对核酸具有很强的亲和力，而当条件改变时，磁珠释放吸附的核酸，能够达到快速分离纯化核酸的目的。整个过程不涉及有机试剂，安全、便捷，提取的病毒DNA/RNA纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒纯化的核酸可适用于各种常规操作，包括RT-PCR、荧光定量PCR等各种下游实验。

产品特点：
·简单：操作上仅包括样品裂解、磁珠吸附、洗涤及洗脱等几个步骤。
·快速：45分钟左右即可完成一次抽提。
·安全：提取过程无需酚lǜ仿有机物。

试剂盒组成：

组分	50次	96次
裂解液RLCK	15ml	60ml
漂洗液PWC	18ml	80ml
漂洗液PWE	12ml	50ml
Carrier RNA	310μg	2×310μg
Proteinase K	1ml	4×1ml
磁珠悬浮液G	1ml	4×1ml
RNase-Free ddH2O（管装)	1ml	2×1ml
RNase-Free ddH2O（瓶装)	15ml	40ml

储存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。Carrier RNA冻干粉能够在室温储存至有效期。溶于RNase-Free ddH2O中的Carrier RNA溶液，应置于-20℃冷冻保存；而Carrier RNA溶液加入缓冲液RLCK后，在2-8℃能保存zuì多48h，请现用现配。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。）
1．本产品适用于手工提取或自动化仪器整合。
2．自备试剂：异bǐng醇，无水乙醇。
3．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的核酸片段较小且提取量降低。
4．若缓冲液RLCK中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。

Carrier RNA溶液的配制如下：
● Carrier RNA溶液:向装有310μg Carrier RNA冻干粉的管子中加入310μl RNase-Free ddH2O，将Carrier RNA彻底溶解，得到终浓度为1 μg/μl的溶液，并按实验情况分装到RNase-Free的离心管中，置于-20℃储存。使用时按照提取的次数取出相应的溶液，该溶液应避免反复冻融，冻融次数不能超过3次。
注意：Carrier RNA冻干粉不能直接溶解于裂解液RLCK中，必须先溶解在RNase-Free ddH2O中，再溶解至裂解液RLCK中。
● Carrier RNA工作液：根据样品的数量计算所需裂解液RLCK和Carrier RNA溶液的体积（见表1，按每310μl RLCK加入2.8 μl Carrier RNA的比例进行配制），将裂解液RLCK与Carrier RNA溶液颠倒混匀，即得到Carrier RNA工作液；为避免溶液出现起泡现象，请勿使用涡旋振荡。
表1.Carrier RNA工作液的配制：

配制数量	裂解液RLCK（ml)	Carrier RNA水溶液（μl)
1	0.31	2.8
2	0.62	5.6
3	0.93	8.4
4	1.24	11.2
5	1.55	14
6	1.86	16.8
7	2.17	19.6
8	2.48	22.4
9	2.79	25.2
10	3.1	28
11	3.41	30.8
12	3.72	33.6
13	4.03	36.4
14	4.34	39.2
15	4.65	42
16	4.96	44.8
17	5.27	47.6
18	5.58	50.4
19	5.89	53.2
20	6.2	56
21	6.51	58.8
22	6.82	61.6
23	7.13	64.4
24	7.44	67.2

操作步骤：

一、手工操作步骤
  使用前请先在裂解液RLCK中加入异bǐng醇，加入体积请按照瓶上的标签。
  使用前请先在漂洗液PWC和PWE中加入无水乙醇，加入体积请按照瓶上的标签。
1．取200 μl血浆/血清/淋巴液（样品需平衡至室温）至1.5ml离心管（自备）中。
2．向离心管中加入15 μl磁珠悬浮液G。
  注意：为了确保磁珠彻底重悬，请在使用前振荡混匀。
3．向离心管中加入20 μl Proteinase K。
4．向样本中加入300 μl Carrier RNA工作液（配制方法见表1)。盖上管盖，振荡混匀10 sec。
  注意：当样本数目比较大时，可以按每300 μl Carrier RNA工作液加入20 μl Proteinase K的比例预先混合，混合后每个样本用量为320 μl，混合后的溶液室温放置不要超过1 h，zuì好现用现配。
5．室温孵育10min，期间每3 min上下颠倒混匀10 sec，使磁珠和核酸充分结合。简短离心以收集附着在管壁及管盖的液体。
6．将离心管放置于磁力架上静置1 min，待磁珠完全吸附时小心去除液体。
7．将离心管从磁力架上取下，加入500 μl漂洗液PWC（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），振荡混匀1 min。
8．将离心管放置于磁力架上静置1 min，磁珠完全吸附后，小心吸去液体。
9．将离心管从磁力架上取下，加入500 μl漂洗液PWE（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），振荡混匀1 min。
10．将离心管放置于磁力架上静置1 min，磁珠完全吸附后，小心吸去液体。
11．重复步骤9和10一次。
12．离心管于磁力架上，56℃晾干5-10min。
  注意：乙醇残留会抑制后续的酶反应，所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥太长时间，以免难以洗脱核酸。
13．将离心管从磁力架上取下，加入100 μl RNase-Free ddH2O，56℃振荡混匀5 min。
14．将离心管放置于磁力架上静置2 min，待磁珠完全吸附后，小心将核酸溶液转移至一个新离心管（自备)中，并于适当条件保存。

二、磁棒法自动化仪器提取步骤（KingFisher Flex）
  使用前请先在裂解液RLCK中加入异bǐng醇，加入体积请按照瓶上的标签。
  使用前请先在漂洗液PWC和PWE中加入无水乙醇，加入体积请按照瓶上的标签。

1．在96深孔板（自备)中加入200 μl血浆/血清/淋巴液（样品需平衡至室温）。
2．每孔加入15 μl磁珠悬浮液G（使用前用移液器吹吸或涡旋振荡混匀磁珠）。
3．每孔加入20 μl Proteinase K。
4．每孔加入300 μl Carrier RNA工作液（为缓冲液RLCK（使用前请先检查是否已加入异bǐng醇）与Carrier RNA溶液的混合液，配制方法按表1的比例进行配制）。盖上管盖，涡旋振荡10 sec。
  注意：当样本数目比较大时，可以按每300 μl Carrier RNA工作液加入20 μl ProteinaseK的比例预先混合，混合后每个样本用量为320 μl，混合后的溶液室温放置不要超过1 h，zuì好现用现配。
5．按下表将样品和试剂转移DW Plate中，并用标鉴笔标下板的名称。

板的名称	96孔板类型	成分	用量
Elution	深孔板	RNase-Free ddH2O	100μl
Wash 2_2	深孔板	PWE（加入无水乙醇)	500 μl
Wash 2_1	深孔板	PWE（加入无水乙醇)	500 μl
Wash 1	深孔板	PWC（加入无水乙醇)	500 μl
Sample	深孔板	Sample	200 μl
		Carrier RNA工作液	300 μl
		Proteinase K	20 μl
		磁珠悬浮液G	15 μl
Tip plate	深孔板	Comb（磁力套)

6．启动KingFisher BindIt 3.2程序，导入Pure Viral DNA_RNA Kit.bdz程序。
7．约33 min后程序执行完毕。
8．取出DNA或RNA样品，用封口膜封好并保存于-80℃。
  注：如需整合其它磁棒法或移液法自动化核酸提取仪器请与我司联系。

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