广谱基因组DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)

特别提示：包括广谱基因组DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：广谱基因组DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)
英文名称：Extraction kit for genomic DNA from blood/cell/tissue
产品货号：WH0018
产品规格：50次|200次

本试剂盒适用于小体系全血（≤1ml）、培养细胞和动物组织等基因组DNA的广谱性提取试剂盒。试剂盒采用了独特的细胞裂解体系，使蛋白变性，结合硅胶膜特异吸附核酸的原理，快速纯化得到基因组DNA。使用本试剂盒纯化所得的DNA无蛋白、核酸酶污染，可直接进行PCR、酶切和Southern杂交等实验操作。

产品特点：
·简单快速：1h内即可获得超纯的基因组DNA。
·广泛：适用于血液、多种动物细胞和动物组织等。
·超纯：获得的DNA纯度高，可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。

材料用量和纯化核酸得率：

样本	处理量	DNA得率（μg)
哺乳动物全血	100～500μl	3～10
禽类、两栖类全血	5μl	5～10
培养细胞	106～10７Cells	5～30
动物组织	30mg	10～30
小鼠尾	1.2cm（尖部)	10～25
大鼠尾	0.6cm（尖部)	20～40

组织匀浆以及裂解充分图例：

组织取样量图例：


试剂盒组成：

组分	50T	200T
缓冲液GA	15ml	50 ml
缓冲液GB	15ml	52 ml
缓冲液GD	13 ml	50 ml
漂洗液PW	15ml	50 ml
洗脱缓冲液TE	15ml	60 ml
Proteinase K	1 ml	4×1 ml
吸附柱CB3	50个	200个
收集管（2 ml)	50个	200个

保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。

选配试剂：红细胞裂解液（Red Cell Lysis Buffer目录号：WH0229)；RNase A（100mg/ml）（目录号：WH0217）

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇。
2．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
3．若缓冲液GA或GB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。
4．所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。

使用方法：
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1．处理材料
  a．如提取材料为血液，可直接使用200μl新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，不足200μl可加缓冲液GA补足；
  注意：如需处理更大体积血液，如300 μl-1 ml，应按以下步骤操作：在样品中加入3倍体积红细胞裂解液（例如，300 μl血液加入900 μl红细胞裂解液），颠倒混匀，室温放置5 min，期间再颠倒混匀几次。10000rpm（~11500×g)离心1 min（若离心机zuì高转速不允许，可3000 rpm（~3400×g)离心5 min），吸去上清，留下白细胞沉淀，加200μl缓冲液GA，振荡至彻底混匀。
  红细胞裂解液本公司另外有售（目录号：WH0229），可根据需要来决定购买。
  b．如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量5-20 μl，可加缓冲液GA补足200μl后进行下面的裂解步骤。
  c．贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液，然后10000rpm（~11,200×g)离心1 min，倒尽上清，加200μl缓冲液GA，振荡至彻底悬浮；
  d．动物组织（脾组织用量应少10 mg）应先打碎处理为细胞悬液，然后10,000rpm（~11,200×g)离心1 min，倒尽上清，加200μl缓冲液GA，振荡至彻底悬浮。
  注意：如果需要去除RNA，可加入4 μl RNaseA（100mg/ml）溶液（客户自备，目录号：WH0217），振荡15 sec，室温放置5 min。
2．加入20 μl Proteinase K溶液，混匀。
  a．提取血液基因组时，只需加入Proteinase K混匀，即可继续进行下一步。
  b．提取细胞基因组时，只需加入Proteinase K混匀，即可继续进行下一步。
  c．提取组织基因组时，加入Proteinase K混匀后，在56℃放置，直至组织溶解，简短离心以去除管盖内壁的水珠，再进行下一步骤。
  注意：不同组织裂解时间不同，通常需1-3 h即可完成（鼠尾需要消化过夜）。不会影响后续操作。每小时颠倒混合样品2-3次，用水浴振荡器也可。
3．加入200μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
  注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。当血液体积≤200μl且没有采用红细胞裂解处理，或是样本储存条件不佳，水浴后颜色可能为深褐色，注意溶液中没有团块等沉淀。
4．加人200μl无水乙醇，充分振荡混匀15 sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
5．将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12000rpm （~13400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。
6．向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD （使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm （~13400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
7．向吸附柱CB3中加入600 μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm （~13400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
8．重复操作步骤7。
9．将吸附柱CB3放回收集管中，12000rpm（~13400×g)离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
  注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
10．将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200μl洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12000rpm （~13400×g)离心2 min，将溶液收集到离心管中。
  注意：洗脱缓冲液体积不应少于50 μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置2 min，12000rpm（~13400×g )离心2 min。

除了广谱基因组DNA提取试剂盒（离心吸附柱法),，我公司还供应以下相关产品：



名称：非冻型尿液DNA保存液
货号：BTN90315
规格：100mL
本品在室温条件下长期保存用于DNA提取的尿液样品保存液。它能够高效、长期保证DNA分子的完整性。

产品特点：
1. 保存时间长，可室温保存尿液DNA长达六个月，尤其适合于野外尿液样品采集。
2. DNA完整性好，纯化后长度在20-50 Kb之间。
3. DNA无化学修饰，提得的DNA可用于酶切、电泳、Southern杂交和PCR等分子生物学实验。
4. 能防止尿液在4℃结晶。
5. 安全可靠，本产品无毒无害。
6. 使用简单，直接把新鲜的尿液样品与本产品混合即可。

储存条件：室温运输及保存，有效期两年。

使用方法：(以DNA提取为例)
1. 迅速将尿液与本产品按10:1的比例混合。
2. 常温闭光保存直到使用。
3. 使用常规液体DNA提取方法提取DNA即可。推荐使用柱式尿液DNA提取试剂盒(BTN90314)，使用柱式尿液DNA提取试剂盒提取本产品保存的尿样，兼容性好，提取效率更高。
4. 提取得到DNA可用于酶切、电泳、Southern杂交和PCR等分子生物学实验。

名称：柱式腐殖酸清除剂
货号：BTN60801
规格：30次
用绝大多数文献报道的方法从土壤或湖海沉积物中提取的DNA都含有棕黑色或黑色的腐殖酸的污染，用百奥莱博的土壤DNA提取试剂盒从泥碳(腐殖酸含量超过50%)等腐殖酸丰富的土壤样品中提取的DNA也有腐殖酸污染，它们往往对PCR等后续反应有极大的抑制作用。本产品专门用于从土壤DNA样品中清除腐殖酸污染。

产品特点：
1.去污染效果好，能使腐殖酸的浓度降低10倍以上。
2.DNA回收率高，一般都在80%以上。
3.操作过程简单快速，只需要10分钟。
4.扩容性好，可小规模操作，也可以大规模操作。
5.处理后的样品原液或稍微稀释后即可用于PCR。

试剂盒组成：

成分	规格
专用上柱液	9ml
离心吸附柱	30套
通用洗柱液	30ml
DNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
1.将0.3mL专用上柱液与50μl或50μl以下的含腐殖酸的DNA溶液轻柔混匀。如果DNA溶液体积超过50μl，专用上柱液的体积需按1:6(DNA溶液:专用上柱液)的比例相应增加。不要剧烈震荡，否则DNA容易断裂。
2. 将离心管中的溶液转移到离心吸附柱中，套上收集管，放于离心管架上，静置3～5分钟，12000～15000g离心1分钟并倒掉收集管中的液体。若一次加不完，可分两次加入并离心。
3. 加入0.5mL通用洗柱液于离心柱中，12000～15000g离心1分钟，倒弃收集管中的废液。
4. 重复第3步操作1次。
5. 12000～15000g离心1分钟以去除离心柱中的残留液体。
6. 将离心柱置于一新的干净的离心管(自备)中，加入50μl通用洗脱液，静置3～5分钟，12000～15000g离心1分钟。
7.离心管底部所得溶液即为纯化的DNA溶液，可立即用于后续实验或者放冰箱长期保存。

使用效果：

图注：从泥碳(腐殖酸含量大于60%)中提取的DNA用本产品处理前(B)和处理后(A)的颜色对比。处理前OD340为4.0(4为所用分光光度计的上限，实际读数可能远高于4)，处理后降低到0.3。处理前的原液、10倍和100倍稀释液均无PCR扩增，而处理后均可以扩增。

疑难解答：
Q: 如何判断提取的DNA没有腐植酸污染？
A：方法一是目测法，即看得到的溶液是否无色。如果呈淡棕黑色或淡黄色，说明可能是少量残留的未除尽的腐植酸。方法二是检测zuì大光吸收。注意：有腐植酸污染并不表示DNA不能使用，有的腐殖酸并不抑制PCR扩增。
Q: 腐殖酸的zuì大吸收波长是多少？
A：腐植酸(humic acid)是一大类呈棕黑色或黑色的物质,其结构千差万别，土壤中腐殖酸的组成和特点随土壤不同而不同，所以其zuì大吸收波长也各不相同。有的土壤的腐殖酸的zuì大吸收波长在260nm(见Appl. Environ. Microbiol.，63：4993，1997)，有的则在340nm，所以用特定的波长测定OD值时波长的选定要根据土壤而决定。Sigma，Fluka等公司出售的腐植酸产品成分一般比较简单，其zuì大吸收波长不能推广到成分更为复杂的土壤腐殖酸样品。
Q:是否腐植酸都会抑制后续的DNA反应？
A：否，因为腐植酸是一大类物质的统称，他们的结构和特性各不相同，所以是否对后续反应有影响zuì好通过实验来验证。如果用提取的DNA溶液原液进行反应而反应没发生，而对照样品(已知的不含污染的DNA)能够发生，说明可能有抑制作用。
Q：除本方法外，还有什么有效方法去除DNA样品中的腐植酸？
A：可以先电泳，然后用超大片段胶回收试剂Magic Gel DNArc(BTN60706)纯化DNA，如此得到的DNA原液一般可以直接扩增。
Q：本产品与柱式DNArc有何区别？
A：本产品由柱式DNArc改进而来，主要区别一是使用了不同的上柱液，减少了硅胶膜对DNA的非特异吸附，更适用于微量DNA样品；二是上柱液中含有腐殖酸去除试剂，适合于土壤DNA样品。
Q：在用土壤DNA进行细菌专一性PCR时，为何没加DNA模版的阴性对照有扩增产物出现？
A：这是由于使用的Taq DNA聚合酶一般从E.coli表达菌株中提取，提取过程中污染了E.coli的基因组DNA，而使用的广谱细菌专一性引物可以识别所有细菌DNA基因组DNA模版，所以会产生扩增。建议使用高质量的Taq DNA聚合酶。