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文献和实验商品化试剂和培养基均经过严格的质量控制以保证其无菌,但它们在操作过程中可能被污染。请遵循以下指导原则进行无菌操作,避免污染。请始终使用适当的灭菌方法(如高压灭菌器、除菌过滤器)对实验室中配制的任何试剂、培养基或溶液进行灭菌。 无菌操作 请始终用 70% 乙醇擦拭双手和工作区。 将容器、培养瓶、培养板和培养皿放入细胞培养通风橱之前,先用 70% 乙醇擦拭其外部。 不要直接从试剂瓶或培养瓶中倾倒培养基和试剂。 使用无菌玻璃或一次性塑料移液管和移液器操作液体时,每只移液管只能使用一次,以避免
【实验操作步骤】 1 使用移液管(枪)吸取15ml淋巴细胞分离液注到50ml分离管下室(15ml分离管吸取4ml); 注意:请用移液管直接将淋巴细胞分离液通过隔板小孔注到分离管下室,勿将分离液置于分离管上室,否则分离液难以流至下室,影响后续分离操作。 2在50ml分离管中加入2-30ml稀释血液样品(15ml分离管倒入0.5-8ml); 注意: 1)请勿将稀释血液样品注入到隔板下室; 2)请将稀释血液从隔板上方缓缓加入,所加入的位置勿距离隔板太远,否则容易在管壁上残留血液样本。
培养操作过程:注意无菌。无论哪一管液体,开盖后尽量立即关上(如果有几瓶都需要开的,也注意,可以虚盖)。盖子向上放。操作时不要从开盖的容器上方经过。另外,无菌台面上摆放的各种东西,最好是一字摆开,平行于自己。尽量不要前后重叠。细胞操作中所用的所有耗材试剂最好都是细胞培养专用。一般都以一次性耗材居多。1ML枪头为加长型专用培养枪头。移液管亦有专用10mL一次性无菌移液管(1)细胞换液:培养皿/瓶用枪头或移液管吸去原培养液,加入新培养液。(2)细胞传代:传代之前先观察,细胞是否密集,是否开始融合。一般融合
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