磷酸化蛋白提取试剂盒

特别提示：包括磷酸化蛋白提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：磷酸化蛋白提取试剂盒
英文名称：Phosphorylated protein extraction kit
产品货号：HR0009
产品规格：50T/100T

我司磷酸化蛋白提取试剂盒适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取磷酸化蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒含有的独特配方能充分保护磷酸化蛋白的磷酸化，够溶解细胞膜包括细胞质膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。

储存条件：蛋白酶抑制剂-20℃保存；蛋白提取液2-8℃保存。
有效期：一年。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
● 不论是细胞或组织样本，应充分保证蛋白样本的新鲜。组织离体后应当立即放到液氮中保存，长期保存的话最好也在液氮中(如果无液氮条件则放置-80℃)。
● 避免蛋白的反复冻融。
●电泳buffer中也可加入Na3VO4。
●本提取配方中含有蛋白激酶及磷酸酶这两种酶的抑制剂，因此不能用于蛋白激酶和磷酸酶这两种酶的免疫共沉淀实验。

产品特点：
1．使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2．将蛋白提取的时间缩短至 30分钟-1小时。
3．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5．蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。
该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● 移液器、吸头 ●离心机及离心管
● 涡旋振荡器 ●冰箱，冰盒

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
●蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
●可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
● Western 实验内参可以选用beta-actin、GAPDH、Tubμlin。
● 更多蛋白提取常见问题分析等资料可以联系本公司索取。
细胞磷酸化蛋白提取：
1．提取液制备：每500μl冷的蛋白提取液中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2．取5-10×106个细胞①，在4℃，1000rpm条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3．用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4．每 5×106个细胞中加入500μl冷的蛋白提取液，混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟。
5.在 4℃，14000rpm条件下离心15分钟。
6．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到磷酸化蛋白。
7．将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验③。
注：
①细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。
② 建议用BCA法进行蛋白定量。
③蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
组织磷酸化蛋白提取：
1．提取液制备：每 500μl冷的蛋白提取液中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2．取100mg组织样本剪碎，加入总蛋白提取液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体①。
3．将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在4℃，10000rpm条件下离心5分钟。
4．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到磷酸化蛋白。
5．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
注：
①用液氮研磨的方法更佳，具体方法可以联系本公司hhsky1017@163.com 索取详细资料。

除了磷酸化蛋白提取试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：CHAPS
货号：BTN131043
规格：5g
CHAPS全名是(3-[(3-Cholamidopropyl)dimethylammonio]-1-propanesulfonate)，中文名是3-[(3-胆酰胺基丙基)二甲基铵基]-1-丙磺酸盐，多一个羟基就是CHAPSO，全名是3-[(3- 胆酰胺基丙基)二甲基铵基]-2- 羟基-1- 丙磺酸盐。它们的特点是能够破坏非特异性蛋白相互作用。与非离子型去垢剂相比引起蛋白聚集的几率更小。电中性并且不会引起变性。可以通过透析去除。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

名称：低pH缓冲液套装
货号：BTN100830
规格：30次
本产品用于Native-PAGE(非变性聚*烯酰胺凝胶电泳)分离碱性蛋白质，与中pH和高pH系统相比，它使用不同的电泳染料。同时电泳时正负极要颠倒。本产品的特点是即开即用，省去用户单独配置每种溶液的麻烦。

产品组成：

成份	规格(30次*)
4×浓缩胶配胶液(pH6.7)	100ml
4×分离胶配胶液(pH4.3)	200ml
低pH电泳液(pH4.5)	10L(干粉)
5×低pH上样液	1ml
使用手册	1份

*注：1次是指的一次mini-Gel电泳

储存条件：常温运输及保存(5×低pH上样液需要-20℃保存)，有效期为一年。

名称：细胞核/浆蛋白抽提试剂盒
货号：SNM414
规格：50T

名称：膜蛋白提取试剂盒
货号：SNM417
规格：50T

名称：蛋白银染试剂盒
货号：SNM442
规格：20T

名称：彩虹预染蛋白Marker(10-170KD)
货号：SNM447
规格：250ul

名称：新型蛋白染色试剂盒(替代考马斯亮蓝染色)
货号：ALH379
规格：20次|60次
本试剂盒是基于一种最新的偶离子染色技术研制而成。它的独特染色成份可以迅速的渗入蛋白凝胶，并选择性的结合蛋白条带，因此不需要脱色就可以直接观察，缩短整个蛋白染色时间至1～1.5个小时。同时由于染料和蛋白的亲和度大大提高，因此它的敏感度可以比传统考马斯亮兰染色高5-10倍。由于它的敏感度和快速的特点，该产品正逐渐的替代了传统考马斯染色的方法。

试剂盒组份(60次)：
染色液A(100×)—————————15ml
染色液B(100×)—————————15ml

产品特点：
1.敏感度高，比传统考马斯染色高5～10倍。
2.速度快，整个过程大约需要1～1.5个小时。
3.肉眼可以直接观察染色过程而且不需要脱色，灵活方便。
4.条带更加锐利和清晰。
5.在5～1500ng范围内有良好的线性关系，大大优于传统染色。

注意事项
1. 染色液含有*醇，为保护您的健康，请戴手套操作，如溅入眼睛应该用大量清水清洗。
2. 染料有时会在容器壁上析出形成沉淀，因此染色液每次使用前充分混匀，将壁上可能析出的沉淀重新溶解，取用后，应该立即旋紧瓶盖，避免长时间暴露于空气中造成挥发，变质，pH 改变等不良影响。
3. 需要用户自备*醇和醋酸。

储存条件：室温密封，有效期12个月。

本制品别名：蛋白快速染色试剂盒|高效蛋白染色试剂盒|超敏感蛋白染色试剂盒

名称：4×SDS-PAGE分离胶缓冲液(PH=8.8)
货号：QN1104
规格：500ml
本试剂是由Tris和SDS混合而成的，主要用于SDS-PAGE凝胶(变性聚*烯酰胺凝胶)制备实验。配制分离胶时，10ml制胶体系中加入2.5ml(4倍稀释)。

Tris-HCl(pH=8.8)——————————1.5mol/L
SDS—————————————————0.4%(W/V)

注意事项：若有白色沉淀析出，可置于37℃水浴，析出溶解后再使用。

储存条件：室温，有效期12个月

名称：高尔基体蛋白提取试剂盒
货号：HR8007
规格：50T/100T
高尔基体(Golgi apparatus,Golgi bodies)是由许多扁平的囊泡构成的以分泌为主要功能的细胞器。又称高尔基器或高尔基复合体；高尔基体是由数个扁平囊泡堆在一起形成的高度有极性的细胞器。常分布于内质网与细胞膜之间，呈弓形或半球形，凸出的一面对着内质网称为形成面(forming face)或顺面(cis face)。凹进的一面对着质膜称为成熟面(mature face)或反面(trans face)。顺面和反面都有一些或大或小的运输小泡，在具有极性的细胞中，高尔基体常大量分布于分泌端的细胞质中。因其看上极像滑面内质网，因此有科学家认为它是由滑面内质网进化而来的。
高尔基体中的酶主要有糖基转移酶、磺基-糖基转移酶、氧化还原酶、磷酸酶、蛋白激酶、甘露糖苷酶、转移酶和磷脂酶等不同的类型。高尔基体的主要功能将内质网合成的蛋白质进行加工、对比分类、与包装，然后分门别类地送到细胞特定的部位或分泌到细胞外。
高尔基体蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种动物细胞和实体软、硬组织样本的高尔基体提取。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理(相关产品HR0389)。
我公司可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、液体、土壤等不同样本的蛋白提取试剂盒，包含用于非双向电泳和双向电泳等不同下游应用的试剂盒以及含去垢剂成分和不含去垢剂成分的蛋白提取试剂盒，总计300 多种蛋白提取试剂盒可供选择。我公司还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体等不同细胞器的提取试剂盒。

储存条件：蛋白提取液2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。
【注】：蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
有效期：一年。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照试剂盒中随产品附带的印刷版说明书，不能参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要最新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
1．正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。
2．螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
3．禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
4．样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5．最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
6．实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
仪器
●离心机● 振荡器● 移液器●冰箱●冰盒
耗材
●离心管● 吸头
试剂
● PBS
(pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液phosphate buffer saline/Dμlbecco’s PBS：约
含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl)

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
● 最好使用Dounce 匀浆器匀浆，如果没有Dounce匀浆器，用普通1ml 玻璃匀浆器匀浆也可。
细胞高尔基体提取：
1．提取液准备：
每500μl冷的蛋白提取液D中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
【注】：
● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
2．取1-2×107个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3．用冷PBS 洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4．加入400μl冷的试剂A，置冰上10分钟。
5．用Dounce 匀浆器充分匀浆几分钟，然后在4℃，1000g 力条件下离心5分钟。
6．弃沉淀，将上清吸入另一预冷的干净离心管。
7.在4℃，3000g 力条件下离心10分钟。
8．弃沉淀，将上清吸入另一预冷的干净离心管。
9.在上清中加入10μl试剂WT，在4℃，20000g 力条件下离心20分钟。
10．弃上清，在沉淀中加入500μl冷的试剂B，混匀。
11.在4℃，20000g 力条件下离心30分钟。弃上清，收集沉淀。
12.在沉淀中加入100-300μl蛋白提取液D，吹打混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟，至沉淀充分裂解，无明显沉淀。
【注】：
● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
13.在4℃，12000g条件下离心15分钟。
14．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到高尔基体蛋白样品。
15．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】：
● 建议用BCA 法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
●蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
组织高尔基体提取：
1．提取液准备：
每500μl冷的蛋白提取液D中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
【注】：
● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
2．取50-100mg 新鲜动物组织样本，用PBS 洗涤干净。
3．用剪刀尽可能剪碎，用冷PBS 洗涤两次。
4．加入400μl冷的试剂A，置冰上10分钟。
5．用Dounce 匀浆器充分匀浆几分钟，然后在4℃，1000g 力条件下离心5分钟。
6．弃沉淀，将上清吸入另一预冷的干净离心管。
7.在4℃，3000g 力条件下离心10分钟。
8．弃沉淀，将上清吸入另一预冷的干净离心管。
9.在上清中加入10μl试剂WT，在4℃，20000g 力条件下离心20分钟。
10．弃上清，在沉淀中加入500μl冷的试剂B，混匀。
11.在4℃，20000g 力条件下离心30分钟。弃上清，收集沉淀。
12．弃上清，沉淀用高尔基体保存液重悬。
13.在沉淀中加入100-300μl蛋白提取液D，吹打混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟，至沉淀充分裂解，无明显沉淀。
【注】：
● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
14.在4℃，12000g条件下离心15分钟。
15．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到高尔基体蛋白样品。
16．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】：
● 建议用BCA 法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
●蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
常见问题分析：
●用什么方法定量蛋白？
建议用BCA 法。不适合用Bradford 法，因为试剂A中含有干扰Bradford 法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford 法定量。
● 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。