石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒

特别提示：包括石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒
英文名称：Paraffin embedded tissue protein extraction kit

产品货号：石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒
产品规格：50T/100T

我司石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒适用于从各种石蜡包埋的组织样本中提取总蛋白，提取过程简单方便，提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。

储存条件：室温保存。
有效期：一年。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● 移液器、吸头 ●离心机及离心管 ● 涡旋混匀器、振荡器 ●冰箱，冰盒 ● 恒温器/水浴锅
使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 注意低丰度蛋白的检测方法。

使用方法：
1．提取液制备：每500μl蛋白提取液A中加入5μl蛋白提取液B，混匀后备用。
2．样本常规脱蜡，然后用流水冲洗30分钟。
【注】：
● 没有流水冲洗条件可以多次换水。
3.将样本用手术剪刀尽可能剪碎，每100mg样本中加入300-500μl蛋白提取液，涡旋振荡10秒。
【注】：
● 样本较小时直接加入蛋白提取液。根据样本大小按比例减少提取液用量。
● 固定过的组织样品蛋白回收率大幅降低，条件允许的情况下尽可能加大组织上样量。
●有匀浆条件的话，组织加入蛋白提取液后进行充分匀浆。
4.在37℃条件下振荡1小时。
【注】：
● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
5.在恒温器(Heat Block)或水浴锅中100℃保温1小时。
6．涡旋振荡10秒混匀。
7.在恒温器(Heat Block)货水浴锅中60℃保温1小时。
【注】：
●中途每20分钟用移液器吹打混匀。
8.涡旋振荡10秒混匀。
9.在12000g条件下离心15分钟。
10.将上清吸入另一干净离心管，即可得到总蛋白。
11.将上述蛋白提取物定量后分装保存备用或直接用于下游实验。
【注】：
●组织量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，大约组织体积的3-5倍即可，请根据实际情况调整。
● 建议用 BCA 法进行蛋白定量。

除了石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒
货号：YT041
规格：50次|100次
本试剂盒提供了一种比较简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提细胞核蛋白与细胞浆蛋白的方法。约90分钟就可以完成培养细胞的细胞核蛋白与细胞浆蛋白的分离。抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA，footprinting，报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。

在研究细胞时经常要研究细胞的不同组份，而研究得最多的两个细胞组份就是细胞核和细胞浆。分离细胞核蛋白和细胞浆蛋白，不仅可以用于研究蛋白在细胞内的定位，而且很多时候分离出来的核蛋白可以用于转录调控方面的研究，例如EMSA(也称gel shift)，footprinting等。

本试剂盒是通过细胞浆蛋白抽提试剂A和B，在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，释放出细胞浆蛋白，然后通过离心得到细胞核沉淀。最后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。本试剂盒可以抽提50个样品，如果每个样品的数量为约二百万细胞或约30-50毫克组织。

产品组份：
细胞浆蛋白抽提试剂A————10ml
细胞浆蛋白抽提试剂B————0.5ml
细胞核蛋白抽提试剂 ————2.5ml

注意事项
1. 需自备PMSF。PMSF一定要在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。PMSF(YT615)可以向百奥莱博订购。
2. 抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3. 本试剂盒对于组织样品，仅适合于新鲜组织，对冻存过的组织抽提效果很差。可以抽提的组织样品数通常不足50个。
4. 使用本试剂盒抽提到的细胞核蛋白与细胞浆蛋白均可直接用百奥莱博的BCA蛋白浓度测定试剂盒(YT036、YT037)测定蛋白浓度。但不适合用Bradford法测定蛋白浓度。

储存条件：-20℃，有效期一年。

名称：SDS-PAGE凝胶制备及电泳试剂盒
货号：RFT076
规格：50次
本公司提供的SDS-PAGE蛋白电泳试剂盒包含凝胶制备以及蛋白电泳所需的全部试剂。本试剂盒可配制至少50块常规大小的PAGE胶。

试剂盒组成：

组份	规格	保存条件
40%PAA(29:1)	100 ml	4℃
4×Tris/SDS分离胶缓冲液 pH8.8	100 ml	4℃
4×Tris/SDS浓缩胶缓冲液 pH6.8	50 ml	4℃
APS(干粉)	0.5 g	RT
TEMED	0.5ml	4℃，避光
4×蛋白电泳上样缓冲液(含还原剂)	1 ml	-20℃
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(干粉)	1 L	RT

使用方法：
一、配制分离胶(各试剂使用量请参考表二)
根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度(表一)，再按照下面的分离胶配方表(表二)配制SDS-PAGE的分离胶(即下层胶)。

表一：不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围：

SDS-PAGE分离胶浓度	最佳分离范围
6%	50-150kD
8%	30-90kD
10%	20-80kD
12%	12-60kD
15%	10-40kD

配制分离胶前，根据以下配方准备10% APS：
10% APS配制-5 ml：将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10%APS。

制备分离胶步骤：
1、参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
2、按照表二将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合；加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
3、在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可)，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
4、静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合

表二：SDS-PAGE分离胶配方表

组份	不同凝胶体积对应各组份的取样量(ml)
	5ml	10ml	15ml	20ml
8％胶
H2O	2.7	5.4	8.1	10.8
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8	1.25	2.5	3.75	5
40％ PAA(29:1)	1	2	3	4
TEMED	0.005	0.01	0.015	0.02
10％ APS	0.05	0.1	0.15	0.2
10％胶
H2O	2.45	4.9	7.35	9.8
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8	1.25	2.5	3.75	5
40％ PAA(29:1)	1.25	2.5	3.75	5
TEMED	0.005	0.01	0.015	0.02
10％ APS	0.05	0.1	0.15	0.2
12％胶
H2O	2.2	4.4	6.6	8.8
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8	1.25	2.5	3.75	5
40％ PAA(29:1)	1.5	3	4.5	6
TEMED	0.005	0.01	0.015	0.02
10％ APS	0.05	0.1	0.15	0.2
15％胶
H2O	1.825	3.65	5.475	7.3
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8	1.25	2.5	3.75	5
40％ PAA(29:1)	1.875	3.75	5.625	7.5
TEMED	0.005	0.01	0.015	0.02
10％ APS	0.05	0.1	0.15	0.2

二、浓缩胶制备：
1、去除覆盖在分离胶上的水层。
2、按照表三将不同体积成分在一个小烧杯或试管中混合；加入10%过硫酸*(代"铵")和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
3、将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
4、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
5、静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。

表三：SDS-PAGE浓缩胶(4%)配方表

组份	不同凝胶体积对应各组份的取样量(ml)
	2 ml	4 ml	5 ml	10 ml
H2O	1.17	2.34	2.925	5.85
4×Tris/SDS浓缩胶buffer pH6.8	0.63	1.26	1.575	3.15
40％ PAA(29:1)	0.2	0.4	0.5	1
TEMED	0.002	0.004	0.005	0.01
10％ APS	0.02	0.04	0.05	0.1

三、电泳：

凝胶凝固好后，根据以下配方准备电泳缓冲液。
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液的配制-1 L：将一包5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液干粉全部倒入1L烧杯中，加入约900 ml水彻底溶解，用水定容至1 L，即配成5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(此溶液不用调节pH值)。用前再稀释5倍即配成1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液。在电泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔)，轻轻的拨出梳子，随后在电泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液。上样，电泳，一般是浓缩胶80V，分离胶120V恒压，等指示前沿溴酚兰电泳到分离胶下缘后，结束电泳，染色或者进行下一步实验。