PKH26细胞增殖与毒性检测试剂盒

特别提示：包括PKH26细胞增殖与毒性检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：PKH26细胞增殖与毒性检测试剂盒
产品货号：HR8304
产品规格：500T

荧光染料PKH26 是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料，可以标记活体细胞，通过与膜结构的脂质分子结合而标记细胞。对细胞毒性较小，荧光背景低，脂溶性高，能够轻易穿透细胞膜，有着强而稳定的红色荧光。
在细胞分裂增殖过程中，PKH26的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减，标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半，根据这一特性，它可被用于检测细胞增殖，细胞周期的估算及细胞分裂等方面。PKH26标记细胞的荧光非常均一，并且分裂后的子代细胞的荧光分配也更均一。在细胞分裂增殖过程中，PKH26标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，荧光强度变为亲代细胞的一半，通过流式细胞仪根据荧光强度的不同，可检测出未分裂细胞，分裂一次(1/2的荧光强度)，二次(1/4的荧光强度)，三次(1/8的荧光强度)，以及更多分裂次数的细胞。PKH26可检测分裂次数多达六次甚至更多。经PKH26标记的细胞可用于体外和体内增殖研究，且具有不会使邻近细胞染色的功能。
PKH26标记的细胞用于体内观察可以长达数周之久，它常被用来做活体细胞检测实验和用荧光电镜观察细胞长期活动的实验。PKH26 毒性较小，不影响细胞的增殖能力。此方法操作简单，且不用放射性同位素，不存在安全隐患。可以更快速，更准确和更安全地得到想要的实验数据。
PKH26标记细胞后通常用流式细胞仪进行细胞增殖检测。
PKH26标记细胞呈红色荧光，荧光波长：λex=551 nm,λem=567 nm。

储存条件：-20℃避光保存。
有效期：一年。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要zuì新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● PBS ● 纯水 ● 移液器及吸头 ● 96孔培养板 ● CO2培养箱 ● 流式细胞仪或荧光显微镜

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
●染色浓度根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。
● 配制的PKH26 母液极易水解，建议分装保存，分装后用封口膜密封管口，再用锡箔纸包裹，zuì好和干燥剂一起用塑料袋密封，≦-20℃冷冻保存。
● PKH26 工作液应现配现用，不能提前配制，因为PKH26 吸水会分解，影响染色效果。
● PKH26 易被水解，在水溶液中会很快变质。母液请在使用过程中避免接触水。工作液在标记细胞的过程中和水接触是在许可的时间范围内的。
● PKH26溶解液在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以37℃水浴片刻至全部融解后使用。
细胞测定
1．从冰箱中取出PKH26试剂，静置几分钟至室温，或者37℃水浴片刻后，离心盛放PKH26的管子，开盖前请务必离心几分钟让试剂充分落入管底后才能开盖。
2．根据需要检测的细胞样品数，用合适的溶液(如：无血清培养基，HBSS或PBS)将PKH26 母液250倍稀释，配制成染色工作液。
3．将制备好的待测细胞用100μl染色工作液重悬，至细胞浓度大约107/ml。
4．在2-8℃培养箱中孵育15-30分钟。
5．离心后去上清，收集细胞，用PBS或无血清培养基洗涤细胞1-2次，zuì后加入PBS或无血清培养基重悬细胞。
6．取500μl 细胞悬液，用流式细胞仪检测。Ex/Em=551/567nm。
7．随后还可按照细胞的正常培养方法进行培养。可以在荧光显微镜下直接观察标记效果，也可以在培养适当时间后再用流式细胞仪检测细胞增殖，或用于其他特定实验目的的细胞荧光示踪。

除了PKH26细胞增殖与毒性检测试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：Hoechst 33258细胞蓝色荧光染料
货号：YT892
规格：10mg
本品Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。

Hoechst 33258染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33258也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。

Hoechst 33258的zuì大激发波长为346nm，zuì大发射波长为460nm；Hoechst 33258和双链DNA结合后，zuì大激发波长为352nm，zuì大发射波长为461nm。

Hoechst 33258溶于水，溶解度可达10mg/ml。用于细胞核染色时，推荐的Hoechst 33258工作浓度为0.5-10μg/ml。

CAS：23491-45-4
分子式：C25H24N6O·3HCl
分子量：533.88

注意事项：
1. 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。
2. 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。抗荧光淬灭封片液(YT097)可以向百奥莱博订购。

储存条件：-20℃避光，有效期一年。

名称：细胞膜红色荧光探针
货号：SY0494
规格：10mg
DiI是一种亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构，进入细胞膜后，DiI在整个细胞膜上扩散，zuì佳浓度时可以使整个细胞膜染色。DiI在进入细胞膜之前荧光非常弱，当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，DiI被激发后可以发出橙红色的荧光，具有很高的淬灭常数，中等强度的光量子和很短的激发态寿命。可以用标准的TRITC滤光片检测。

DiI通常不会明显影响细胞的生存力，因此被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂（long-term tracer）。除了zuì简单的细胞膜荧光标记外，还可以用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞迁移，通过FRAP（Fluorescence Recovery After Photobleaching）检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。

CAS：41085-99-8
分子式：C59H97ClN2O4
分子量：933.87
外观：红色至暗红色，紫色至深紫色粉末
Ex/Em：550/567 nm
推荐滤光器：XF32-Omega, 31002-Chroma
纯度：≥98%（TLC）
溶解性：溶于DMF，DMSO，甲*
储存条件：4℃避光,有效期一年
结构式：


使用方法

1. 染色液制备
（1）配置DMSO或EtOH 储存液：储存液用 DMSO或EtOH配置浓度1～5 mM。
【注】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融。
（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～5 μM的工作液。
【注】工作液zuì终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。

2. 悬浮细胞染色
（1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。
（2）37 ℃孵育细胞 2～20min，不同的细胞zuì佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
（3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5min。
（4）倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
（5）重复（3），（4）步骤两次以上。

3. 贴壁细胞的染色
（1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
（3）在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
（4）37 ℃孵育细胞 2～20min，不同的细胞zuì佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸干培养基。

4. 显微镜检测
（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器的选择参见表1。
（2）多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：
a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；
b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；
c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005

5. 流式细胞仪检测
经DiO，DiI，DiD和DiR染色的细胞可分别用流式细胞仪的FL1，FL2，FL3或FL4通道检测。