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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
457
- 英文名:
BL21-Star(DE3)pLysS Chemically Competent Cell
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-80℃
- 规格:
10×100μl/50×100μl
特别提示:包括BL21-Star(DE3)pLysS化学感受态细胞在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:BL21-Star(DE3)pLysS化学感受态细胞
英文名称:BL21-Star(DE3)pLysS Chemically Competent Cell
产品货号:MQ0041
产品规格:10×100μl/50×100μl
BL21 Star(DE3)pLysS菌株来源于BL21(DE3),含有rne131突变(RNaseE基因),RNaseE基因的突变降低了內源RNase的积累,增强菌株细胞内mRNA的稳定性,从而提高异源蛋白的表达水平。
主要适用于T7启动子表达载体(如 pET系列)的高水平蛋白表达,同时含有大肠杆菌RNA聚合酶,也可用于非 T7启动子表达载体(pGEX,pMAL等)的蛋白表达。由于BL21 Star(DE3)菌株的异源基因基础表达水平较高,所以不适合毒性蛋白的表达。BL21 Star(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒,具有氯霉素抗性。pLysS含有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,还可与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性,进而降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达。pLysS质粒含有p15A复制起始子,可以和含有pUC或pBR322等复制起始子的质粒兼容。
BL21 Star(DE3)pLysS感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达107 cfu/μg DNA。
保存条件:-80℃
基因型:
F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm rne131(DE3)pLysS(CamR)
操作说明:
1.BL21 Star(DE3)pLysS感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的质粒并用手拨打EP管底轻轻混匀,冰中静置25分钟。
2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
4.5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项:
1.感受态细胞zuì好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
2.混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少zuì终用于涂板的菌量。
4.诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。
5.为获得需要量的蛋白,zuì佳诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。
6.BL21 Star(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒,除复苏培养基为无抗生素外,其余所用培养基、培养液均应含有34µg/ml氯霉素,以防质粒丢失。
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文献和实验) 3:BL21(DE3) pLysS菌株 该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。 基因型:F-,ompT hsdS(rBB-mB-),gal, dcm(DE3,pLysS ,Camr 4:JM109菌株 该菌株在使用pUC系列
【交流】转载:JM109,DH5a,BL21这些感受态有何区别
子的表达载体(如pET系列)的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。 基因型:F-,ompT, hsdS(rBB-mB-),gal, dcm(DE3) 3:BL21(DE3) pLysS菌株 该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。 基因型:F-,ompT hsdS(rBB-mB-
) 3:BL21(DE3) pLysS菌株 该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。 基因型:F-,ompT hsdS(rBB-mB-),gal, dcm(DE3,pLysS ,Camr 4:JM109菌株 该菌株在使用pUC系列
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