大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞库存

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百奥莱博专业生产销*(代"售")大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞库存，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞库存
编号：BTN90505
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
英文名：E.coli BL21 (DE3) Chemical Competent Cell
本产品是大肠杆菌BL21(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。使用pUC19质粒检测本产品，转化效率可达107。BL21(DE3)菌株适合表达非毒性蛋白。
该感受态细胞用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3 区的lacUV5启动子，该区域整合于BL21的染色体上。
菌株基因型为：F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3)

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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·姬姆萨染色液(吉姆萨染液)
编号：BTN170502
英文名称：Giemsa Staining Solution
规格：250mL
本产品由溶液A(Giemsa Stain 储存液,10×)和溶液B(磷酸盐缓冲液)组成,溶液A：溶液B=1：9混合成工作液后使用；亦可以分开使用,即先用Giemsa Stain染色,再经磷酸盐缓冲液处理,亦可以得到满意的染色效果。

姬姆萨色素(又称吉姆萨色素)是由天青Ⅱ与伊红混合而成,Giemsa染色原理和结果与瑞氏染色基本相同,姬姆萨染色液对胞浆着色力较强,能较好的显示胞浆的嗜碱性程度,特别是对血液和骨髓细胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗粒,着色清晰,但是对胞核着色偏深,核结构显色不佳,故姬姆萨染液常与瑞氏染液联合使用。本产品以进口的姬姆萨色素、甲醇为主要原料,含本公司特有衬染剂,经研磨配制而成,能呈现出清晰的细胞染色效果,经常用于组织切片、血液和细胞涂片、细菌、染色体显带、原生动物寄生虫等染色。嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结合,染粉红色,称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质。

产品组成：

 

成分	规格
溶液A	10ml
溶液B	100ml
说明书	1份

储存条件：常温运输,室温避光保存,有效期一年。

使用方法：(仅供参考)

一、一步法涂片染色
1. Giemsa工作液的配制：
按照溶液A：溶液B=1：9 混合,即取1 份溶液A(Giemsa Stain储存液,10×)加入到9份溶液B(磷酸盐缓冲液)中充分混匀,即成Giemsa工作液(此工作液不易保存,现配现用)。
2. 常规方法制备血液涂片或骨髓涂片,待涂片自然干燥后,用甲醇固定1～3min。
3. 将血液涂片或骨髓涂片放置染色架上,滴加Giemsa工作液覆盖涂片,室温滴染15～30 min。
4. 用自来水或蒸馏水从玻片一端缓慢的轻轻冲洗。
5.(可选)0.1%乙酸分化数秒。
6.干燥,镜检。

染色结果：

嗜酸性颗粒	粉红色
嗜碱性颗粒	紫蓝色
中性颗粒	淡紫色

二、两步法涂片染色
1. Giemsa工作液的配制：
按照溶液A：溶液B=1：4混合,即取1份溶液A(Giemsa Stain储存液,10×)加入到4份溶液B(磷酸盐缓冲液)中充分混匀,即成Giemsa工作液(此工作液不易保存,现配现用)。
2. 常规方法制备血液涂片或骨髓涂片,待涂片自然干燥后,用甲醇固定1～3min。
3. 将血液涂片或骨髓涂片放置染色架上,滴加Giemsa工作液覆盖涂片,室温滴染10～15min。
4. 加入等量磷酸盐缓冲液,轻轻晃动载玻片,室温静置15min。
5. 用自来水或蒸馏水从玻片一端缓慢的轻轻冲洗。
6.干燥,镜检。

染色结果：

嗜酸性颗粒	粉红色
嗜碱性颗粒	紫蓝色
中性颗粒	淡紫色

三、组织切片染色
1．Giemsa工作液的配制：
按照溶液A:溶液B=1:9混合,即取1份溶液A(Giemsa Stain储存液,10×)加入到9份溶液B(磷酸盐缓冲液)中充分混匀,即成Giemsa工作液(此工作液不易保存,现配现用)。
2．新鲜组织立即置于Regaud固定液(按3%重铬酸*:甲醇=4:1 配置,用前混匀,1-2天即失效)固定2天,期间更换1次固定液。
3．3%重铬酸*固定1天。
4．流水冲洗16个小时或过夜。
5．照常规脱水、包埋。
6．切片厚度约为5μm,常规脱蜡至水。
7．蒸馏水清洗2次,每次1～2min。
8．入含Giemsa工作液染缸,浸染18～24h。
9．蒸馏水稍清洗。
10．0.5%乙酸清洗1～2min。
11．自来水稍微冲洗。
12．用无水乙醇迅速脱水3次,每次5～10s。
13．二甲*透明,中性树脂封固。

染色结果：

细胞核	蓝色至紫色
细胞质	淡蓝色
嗜铬细胞	黄绿色
结缔组织	淡红色

注意事项：
1．血液涂片或骨髓涂片应厚薄均匀,否则影响染色效果。
2．涂片染色中Giemsa染色后,请勿先去除染液或直接对涂片用力冲洗。
3．如果染色过深或过浅,应调整染色时间或染色液的浓度。
4．Giemsa涂片染色和组织切片染色中,pH值对染色有一定影响,载玻片应清洁、无酸碱污染,否则影响染色效果。
5．染色液经稀释后液面应金属光泽则表示染液有染色作用,否则染色液可能失效。
6．Giemsa组织切片染色中,染色后需用大量0.1～0.5%乙酸急速冲洗,避免浮面沉淀物污染切片后难以洗脱。
7．0.5%乙酸分化常用于Giemsa组织切片染色,如有必要亦可用于细胞涂片,但其浓度应适量下调。0.5%乙酸分化切片时,切片呈粉红色即可终止。
8．组织切片染色中,无水乙醇脱水要迅速,否则切片亦褪色。
9．本染色液可重复使用,但不能多次重复,若有沉淀物应过滤后使用。


大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞库存关键词：E.coli BL21 (DE3) Chemical Competent Cell,大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞,BTN90505


·蛋白marker(14.4～97.4kD)
编号：BTN70102B
英文名称：Protein Marker(14.4-97.4kD)
规格：20次
本产品为蛋白质电泳标准系列，为已知的标准蛋白质混合物，在SDS-PAGE时可以作为分子量标准，估计其他蛋白质的分子量大小。

产品特点：
1．简单，不需要自己单独购买各种蛋白质配置。
2．本产品有粉末型和溶液型两种，十分稳定。
3．本系列三种产品涵盖从 3.3 KD-200 KD的分子量范围。

所含成分及其分子量		A型	B型	C型
肌球蛋白重链	200.0KD			有
*调素结合蛋白	130.0KD			有
兔磷酸化酶B	97.4KD		有	有
牛血清白蛋白	66.2KD		有	有
兔肌动蛋白	43.0KD		有	有
牛碳酸酐酶	31.0KD		有
人生长激素	22.0KD
大豆胰蛋白酶抑制剂A	20.1 KD	有	有
鸡蛋清溶菌酶	14.4KD	有	有
人工合成肽1	7,823D	有
人工合成肽2	5,856D	有
人工合成肽3	3,313D	有

产品组成：

成分	A型	B型	C型
蛋白分子量标准A型(低分子量)	15T	-	-
蛋白分子量标准B型(中分子量)	-	20T	-
蛋白分子量标准C型(高分子量)	-	-	10T
1×SDS-PAGE上样液	0.5ml	0.5ml	0.5ml
说明书	1份	1份	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

使用方法：

一、干粉型的使用：
1．开封后将1×SDS-PAGE上样液加入到样品管中溶解蛋白质粉末，各分子量标准所需的1×SDS-PAGE上样液的体积如下:
低分子量标准(BTN70102A)需要150μL。
中分子量标准(BTN70102B)需要200μL。
高分子量标准(BTN70102C)需要100μL。
2．沸水浴中加热 5分钟。
3．短暂离心后将溶液按每管10μL的体积分装到多个塑料离心管中，置-20℃长期保存。
4．使用时每次取一管，室温放置直到液体融化后，沸水浴中加热3～5分钟，即可上样进行SDS-PAGE电泳。BTN70102A型推荐使用Tricine-甘油SDS-PAGE胶、BTN70102B 推荐使用12%的分离胶、BTN70102C 推荐使用8%的分离胶。
5．电泳后进行考马斯亮蓝G-250染色，染色后出现的带型见上表。

二、溶液型的使用：
1．将溶液按每管一次电泳的用量分装到塑料离心管中冻存，每次只用一管，这样避免反复冻融。
2．使用时取一管室温放置直到液体融化。
3．沸水浴中加热3～5分钟后趁热上样并进行SDS-PAGE电泳。BTN70102A型推荐使用Tricine-甘油SDS-PAGE胶、BTN70102B 推荐使用12%的分离胶、BTN70102C 推荐使用8%的分离胶。
4．电泳后进行考马斯亮蓝G-250染色，染色后出现的带型见上表。

疑难解答：
1.分子量不同，SDS-PAGE的分离胶和浓缩胶浓度不同。需要自己根据具体情况调整。
2.电泳之后可将胶进行染色观察，如果使用传统配方进行染色时效果不好或考虑其毒性，请选择本公司的一步式蓝色PAGE染液(BTN61204)，该产品具有染色快，无毒，灵敏性高等物点，是常规蛋白染色液的替代品。


大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞库存关键词：E.coli BL21 (DE3) Chemical Competent Cell,大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞,BTN90505

*铝酸* Ara-C 13775-52-5
BTN100920 生物素标记dUTP溶液 Biotin-11-dUTP Solution
RN0301 RNApure 超纯总RNA快速提取试剂盒
37348-90-4 两性电解质5-7
甲基蓝 DHBT 28983-56-4
BL1339 ECL Plus荧光检测试剂(ECL超敏发光液)
硫*(代"酸")鱼精蛋白 HATU 53597-25-4
E0616 抗凝裂解大牛血
柠檬酸* 1,3-Dihydroxynaphthalene 6132-04-3
F020228 兔抗绵羊IgG抗体 Rabbit Anti-Sheep IgG
F050312 小鼠IgA抗体 Mouse IgA
606-68-8 NADH Na2 还原型辅酶Ⅰ二*
RN2701 病毒RNA快速提取试剂盒
PY02-297  改良罗氏培养基基础  250克  

我公司生产供应销*(代"售")的克隆与表达正全品类优惠促销，十分期待您的咨询选购大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞库存。