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MSU440

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  • ¥980 - 3650
  • 康朗生物
  • CAT#: KL21070
  • 中国/上海
  • 2025年07月15日
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      60

    • 英文名

      MSU440 Chemically Competent Cell

    • 保质期

      6个月

    • 供应商

      上海康朗生物科技有限公司

    • 保存条件

       -80℃

    • 规格

      50μl/支

    MSU440

    MSU440 Chemically Competent Cell 产品说明书




    产品规格 (CAT#: KL21070)
    MSU440:                                                                 100μl/支
    pCAMBI2301(control vector,10ng/μl )                      10μl
    保存条件(保质期):                                         -80℃(12个月)



    基因型

    Agrobacterium rhizogenes(str)  MSU440 Ri (agropine type)


    产品说明

    发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌,它能
    感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。 MSU440发根农杆菌菌株含有农杆碱型
    Ri质粒,具有广泛的宿主范围(玉米,烟草,茶树,青蒿等),同时具有链霉素抗性。本公司生产的 
    MSU440化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,pCAMBIA2301质粒(卡那霉素抗性)检测,转化效率
    >104 cfu/μg DNA。




    常规操作方法
    1.取-80℃保存的Ar MSU440发根农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化,处于冰水混合状态时插
    入冰中。

    2.每100μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA(转化效率较高,第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量)
    ,用手快速、剧烈拨打管底混匀或用枪吹吸混匀,依次放于冰中静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、
    冰浴5分钟。

    3. 冰浴中拿出放室温,加入700μl 无抗生素的TY液体培养基,于28℃振荡培养2小时。
    4. 6000 rpm 离心一分钟收菌,留取100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的TY平板上,
    倒置放于28℃培养箱培养2-3天



     
    ● 农杆菌相关抗生素配方:
     
       抗生素    配方      原液     工作液
      羧苄青霉素 (carb)   双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌  50 mg/ml  50 μg/ml
      硫酸卡那霉素(kan)   双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌  50 mg/ml  50 μg/ml
      链霉素 (strep)   双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌  10 mg/ml  50 μg/ml
      利福平 (rif)  DMSO溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌  10 mg/ml  20 μg/ml
      庆大霉素 (gent)   双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌   20 mg/ml  40 μg/ml
      氯霉素(cam   无水乙醇溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌  34 mg/ml  34 ug/ml


    常用农杆菌抗性: (R:抗;S:敏感。)
    农杆菌菌株 羧苄青霉素(carb) 链霉素(strep) 利福平(rif) 氯霉素(gent) 硫酸卡那霉素(kan)
    Ar.A4 S S S S R
    MSU440 S R S S S
    Ar.Qual S R S R S
    C58C1 S R R S S
    ATCC15834 S S S S S
    K599 S R S S S
    Ar.1193 R R R S S



    ● TY配方(1L):
    Tryptone                5g
    Yeast extract          3g
    补水到1L体积,完全溶解后,121度、20分钟高温灭菌
    配制1M的氯化钙水溶液,121度、20分钟高温灭菌
    每1L 灭菌的TY液体营养液中加入10ml 无菌的1M氯化钙水溶液即可。
    若配制TY固体培养基,则加入15g 琼脂粉。


    注意事项
    1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率急剧下降;质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。
    2. 混匀质粒时应用手指快速拨打管底或用枪吹吸混匀,务必使质粒快速、均匀分散开,与感受态细胞充分接触。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
    3. 平板上阳性克隆密度过大时,由于营养不足,阳性克隆生长变慢,菌落变小,为了获得大的菌落,应减少质粒用量或降低涂板的菌量。
    4. MSU440具有链霉素抗性,不可用于具有链霉素抗性质粒的转化。
     

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