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大鼠睾丸支持细胞提取物
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上海康朗生物科技有限公司
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干冰
生殖系统
睾丸支持细胞是睾丸间质中的主要细胞类型,能分泌多种生长因子和免疫抑制因子,不仅可为精子提供营养支持和免疫保护,也能对其他细胞,如胰岛和神经细胞提供营养支持,而且当其与胰岛或神经细胞共移植时,也能够为这些细胞提供免疫保护,提高植活率。因此,睾丸支持细胞在细胞移植中具有广泛的应用前景。
基因组DNA制备:采用酶解法裂解细胞,利用硅胶膜离心柱特异地吸附DNA,去除蛋白质、盐类、脂类等杂质,有效地保持基因组DNA的完整性。提取的DNA适用于酶切、PCR、Southern Blot等实验。 总RNA制备:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。康朗生物提供的总RNA样品附有RNA样品OD值、浓度、总含量等。 cDNA制备:纯化后的总RNA来合成cDNA第一链,以50ul总反应体系进行逆转录,体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及2μg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA,1 μl cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的质控分析,保证了产品的质量。 microRNA制备:采用具有超强的裂解能力和抽提灵敏度microRNA试剂盒制备,结合试剂盒采用的特殊吸附膜,大大增加了小分子RNA的吸附力,获得的microRNA纯度好,得率高,可以直接用于各种下游实验,如Northern Blot分析,Real-Time PCR,Microarray Analysis等。 蛋白制备:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl,1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备细胞蛋白裂解液,离心去除细胞碎片,通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度,组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF,-80度保存。 细胞沉淀制备:首先分离培养出高质量的原代细胞,然后经平衡盐溶液清洗去除细胞表面杂质,最后用合适的裂解液裂解细胞并离心获得细胞沉淀。
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