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人脾淋巴细胞提取物
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上海康朗生物科技有限公司
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淋巴、脾及血液
脾脏是机体最大的免疫器官,占全身淋巴组织总量的25%,含有大量的淋巴细胞和巨噬细胞,是机体细胞免疫和体液免疫的中心。B淋巴细胞约占脾内淋巴细胞总数的55%,在肿瘤抗原刺激下转化为浆细胞,继而分泌特异性抗肿瘤的免疫球蛋白IgG,且具有抗原提呈能力.研究发现,脾脏切除后,机体免疫球蛋白含量异常且血清IgM水平明显下降,从而影响肿瘤的发生、发展。T淋巴细胞脾脏拥有全身循环T淋巴细胞的25%,直接参与细胞免疫,并对外周血中T细胞亚群的分布有重要调节作用.脾脏对T淋巴细胞免疫的调节作用是肿瘤免疫的一个重要环节.脾脏切除后,外周血T淋巴细胞亚群发生改变,辅助性T淋巴细胞的(Th)数量减少,抑制性T淋巴细胞(Ts)数量相对增高,导致肿瘤免疫抑制。
基因组DNA制备:采用酶解法裂解细胞,利用硅胶膜离心柱特异地吸附DNA,去除蛋白质、盐类、脂类等杂质,有效地保持基因组DNA的完整性。提取的DNA适用于酶切、PCR、Southern Blot等实验。 总RNA制备:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。康朗生物提供的总RNA样品附有RNA样品OD值、浓度、总含量等。 cDNA制备:纯化后的总RNA来合成cDNA第一链,以50ul总反应体系进行逆转录,体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及2μg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA,1 μl cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的质控分析,保证了产品的质量。 microRNA制备:采用具有超强的裂解能力和抽提灵敏度microRNA试剂盒制备,结合试剂盒采用的特殊吸附膜,大大增加了小分子RNA的吸附力,获得的microRNA纯度好,得率高,可以直接用于各种下游实验,如Northern Blot分析,Real-Time PCR,Microarray Analysis等。 蛋白制备:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl,1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备细胞蛋白裂解液,离心去除细胞碎片,通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度,组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF,-80度保存。 细胞沉淀制备:首先分离培养出高质量的原代细胞,然后经平衡盐溶液清洗去除细胞表面杂质,最后用合适的裂解液裂解细胞并离心获得细胞沉淀。
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