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lymphoprep分离液,1
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lymphoprep分离液
1.077密度分离液研卉生物
Serumwerk Bernburg AG
1858
现货
500ml
Lymphoprep人淋巴细胞分离液(即用型)
4x250ml
1、
在含有抗凝剂(EDTA、heparin、或ACD)的管子内收集血液,或者用去纤维蛋白的血液。此处抗凝剂的选择取决于得到淋巴细胞以后,后续实验的要求,一般选取EDTA即可。
2、
用等体积的0.9%的NaCl溶液(即生理盐水)稀释血液。
3、
在12-15ml的离心管内,将6ml稀释后的血液铺在3ml分离介质Lymphoprep上。
此处铺层可以采用从上面铺,或从下面铺两种方法。铺层的关键是不能让血液和分离液混在一起,要界面分层清晰。
4、
在室温下——20摄氏度左右,用水平转子,800g的离心力,离心20分钟。(如果血液存放时间超过2小时——从人体抽出算起,离心时间延长为30分钟)。
5、
离心前和离心后,离心管内液体分层如下图所示。
离心后,离心管内位于血液和分离液界面处的明显的一层即为淋巴细胞层。
用移液管直接吸取淋巴细胞层,注意,不要去除上面的血液层,而是直接吸取。移至另一离心管中。
6、
用大约2倍体积的0.9%的NaCl溶液(生理盐水)稀释收集到的淋巴细胞,在250g-300g的离心力下,离心10分钟,(此处在加上稀释液后的体积在15ml离心管内不宜超过5-6ml,体积过大,会降低淋巴细胞的产率),收集沉淀,即得到所需的人外周血单个核细胞,即可用于后续的实验。
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