柱式昆虫DNA提取试剂盒

本试剂盒是专门用于从昆虫、节肢动物、蛔虫、扁形虫和一些富含多糖的动物组织中提取基因组DNA的试剂盒。其原理是基于去垢剂在适当的离子强度条件下，特异地跟基因组DNA结合形成沉淀，然后在用硅胶膜离心吸附法进行进一步纯化得到DNA。

产品特点：

• 适用于用常规方法难以提取的、各种富含多糖的动物，包括昆虫、节肢动物、蛔虫、扁形虫等。


• 除新鲜样品外，还适合于各种保存状态的样品，包括冷冻的样品、用乙醇保存的样品和福尔马林保存的样品。


• 提取到的基因组DNA完整性，长度一般在20～50 Kb。


• DNA纯净，OD260/280一般都在1.8左右，可直接用于PCR、酶切、杂交等。


• 操作简单，整个过程约30分钟。


• 安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。

产品组成：

成分	规格
溶液A	50mL
溶液B	50mL
溶液C	50mL
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50mL
DNA洗脱液2.0	10mL
说明书	1份

保存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：

• 称取0.1～0.3g昆虫样品转移到塑料研钵中，液氮研磨成粉后转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。
  注意：最好避免使用含二氧化硅的玻璃研钵，因为DNA会吸附在表面，影响得率。


• 在离心管中加入1mL 65℃预热的溶液A并用移液枪头充分吹打混匀(如果溶液A有沉淀，需先在65℃加热溶解后摇匀再使用)。


• 65℃保温5～30分钟，其间最好吹打混匀2～3次。


• 12000～15000g室温离心3分钟。


• 将不超过0.75mL的上清转移到新离心管中。有时候上清液中还会有少量细小悬浮物，但对后续操作没有影响，不必进行特殊处理。


• 在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30秒充分混匀，溶液将呈白色混浊状。


• 将其置于冰浴中放置5～10分钟。


• 12000～15000g室温离心3分钟，转移上清到新的1.5mL塑料离心管中。


• 加入0.2mL的氯仿(自备)，震荡器上充分振荡30秒混匀。


• 12000～15000g室温离心3分钟，两相交界面将有白色膜状物，小心转移上清到新1.5～5mL塑料离心管中。
  注意：由于下一步要加1.5倍体积的溶液C，所以新的离心管的体积要足够大。


• 加入1.5倍体积的溶液C，上下颠倒30秒混匀，然后分多次的将混合液转移到离心吸附柱中。


• 每次转移0.7～0.8mL混合液后，室温放置5～10分钟。


• 12000～15000g室温1分钟，弃穿透液。


• 对需要多次上柱的样品，可以在此将剩余的样品加到离心吸附柱式中，重复第12～14步的操作。


• 将0.7mL通用洗柱液加入离心柱，室温离心1分钟，弃穿透液。


• 在离心吸附柱中加入0.3mL的通用洗柱液，12000～15000g离心半分钟(此步为第二次洗涤)。


• 空甩1分钟去除残留液体。


• 将离心柱放置在一新的1.5mL塑料离心管中，加入30～100μL DNA洗脱液2.0。


• 室温放置5分钟后离心1分钟，管底即为昆虫DNA溶液，可立即使用，也可长期保存在－20℃。


• 可以重复上步一次，以洗脱更多的DNA。