5×考马斯亮蓝G-250

特别提示：包括5×考马斯亮蓝G-250在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：5×考马斯亮蓝G-250
英文名称：5×G250(Protein quantitative analysis)
产品货号：QN1071
产品规格：100mL|500mL

考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的zuì大吸收峰的位置(Imax)，由465nm变为595nm，在一定的浓度范围内，测定的吸光度值A595与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM，但受略高浓度的去垢剂影响，需确保SDS的浓度低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20, 60, 80低于0.06%。

除了5×考马斯亮蓝G-250,，我公司还供应以下相关产品：



名称：L-谷胱甘肽(还原型)
货号：BTN120705
规格：5g
还原型谷胱甘肽是人类细胞质中自然合成的一种肽，由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成，含有巯基(－SH)，广泛分布于机体各器官内，作为一种抗氧化剂，可以保护肝脏细胞膜，增强肝脏的解毒能力，为维持细胞生物功能呈有重要作用。本产品可用于配制纯化GST标签蛋白的洗脱液。



储存条件：常温运输，4℃保存，有效期两年。

名称：10%SDS溶液
货号：SNM400
规格：500ml

名称：曲拉通X-114(分子生物学级)
货号：SY0309
规格：500ml
Triton X-114，中文名字曲拉通X-114，一种非离子表面活性剂。其浊点为23℃，在低于该温度时，Triton X-114能与水互溶；当高于该温度时，则分离成水相和去污剂相，基于该特点，Triton-X114在生物化学实验中常用于水相蛋白和脂蛋白的分离，如膜蛋白的提取等。

CAS：9036-19-5
分子式：(C2H4O)nC14H22O, n=7or8
分子量：537
密度：1.058 gm/ml（25℃）
临界胶束浓度：~0.2 mM or 0.009% (w/w in water)
浊点：23℃
储存条件：室温
结构式


名称：植物内质网蛋白提取试剂盒(非酶法)
货号：HR8043
规格：50T/100T
植物内质网蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种植物细胞和各种实体植物组织，如叶片、根、种子等植物组织中提取内质网蛋白。提取过程简单方便，制备的内质网蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。
本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解植物内质网组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒。也可以将zuì后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理。
本试剂盒采用非酶法提取，提取过程简单方便，速度快，可在1小时内完成，而且绝少交叉污染，但是蛋白回收率相比酶法较低。酶法提取制备的蛋白，回收率稍有提高，蛋白纯度高，保持天然活性，但是耗时较长。如果需要更加快捷的提取试剂盒，可以选择非酶法的提取试剂盒，对提取速度没有要求的话，可以选择酶法提取试剂盒。请根据实际需要选择试剂盒。
我公司可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、液体、土壤等不同样本的蛋白提取试剂盒，包含用于非双向电泳和双向电泳等不同下游应用的试剂盒以及含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒，专用于蛋白质谱检测的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒可供选择。我公司还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体等不同细胞器的提取试剂盒。

储存条件：蛋白提取液2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。提取液A长期不用请置-20℃保存。
【注】：
●蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
●蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
效期：一年。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要zuì新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
1．正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得zuì佳实验效果。
2．螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
3．禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
4．样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5．zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
6．实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

产品特点：
● 使用方便。
●含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
● 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
●蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
仪器：
●离心机● 振荡器● 涡旋混匀器● 匀浆机/Dounce匀浆器● 移液器●冰箱●冰盒
试剂：
● PBS(pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液(1×))phosphate buffer saline/Dμlbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl)
耗材：
●离心管● 吸头● 100um细胞筛

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
●蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
●可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

1．提取液制备：
每300μl提取液C中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
【注】：
● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
2．取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的200-500mg 植物组织样本用手术剪刀尽可能剪碎，加入1ml 提取液A 后用匀浆机充分匀浆或者用Dounce 匀浆器充分匀浆。
【注】：
● 匀浆尽可能充分。至无明显可见固体。
●培养细胞直接收集细胞后用Dounce匀浆器匀浆即可，匀浆后加提取液A混匀后直接进行以下步骤离心。
● 处理叶片等组织样本如果没有匀浆机，也可先加少量提取液A 后用Dounce 匀浆器充分匀浆后再加提取液A 混匀。
3．将匀浆用100μm细胞筛过滤。
【注】：
● 液体量少时可以加入1-2ml PBS 混匀后再用细胞筛过滤。
● 没有细胞筛时可以不过滤，将匀浆液在4℃静置1分钟，待大的粗纤维，成团组织块等没有破碎的组织块自然沉降，吸取上清。或者以低于100g 力条件下离心1分钟，收集细胞上清，弃组织沉淀。
● 部分黏液较多的植物样本可能难以吸取，可以将1ml 吸头的口剪掉一点再吸。
4．将滤液在200g条件下离心3分钟，弃沉淀，收集上清。
5.在500g条件下离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
6．在1000g条件下离心10分钟，弃沉淀，收集上清。
7．将上清20000g 力离心10分钟。弃沉淀，取上清。
8．将上清30000-50000g离心45分钟。弃上清，留沉淀。
【注】：
● 如果条件允许，可将离心力加大到100000g，有利于回收光面内质网小泡。
9.在沉淀中加入400μl冷的试剂B，充分混匀。
10.在4℃，30000g-50000g 力条件下离心45分钟。
【注】：
● 如果条件允许，可将离心力加大到100000g，有利于回收光面内质网小泡。
11.在沉淀中加入200-300μl提取液C，充分混匀。
12．置振荡器2-8℃振荡30分钟。
【注】：
●用振荡器/摇床的较低转速，保持液体有轻微晃动即可。
● 没有低温振荡条件可以不振荡，在2-8℃静置，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
13.在4℃，14000g条件下离心15分钟。
14．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到核蛋白。
15．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】：
● 建议用BCA 法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
●蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
常见问题分析：
●蛋白浓度低？
植物核蛋白丰度比较低，在条件允许的情况下，尽可能增加样本量。
处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当增加试剂A的匀浆次数，并适当延长试剂A和B的处理时间即可。zuì好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
●用什么方法定量蛋白？
建议用BCA 法。不适合用Bradford 法，因为试剂A中含有干扰Bradford 法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford 法定量。
● 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。