- ￥380 - 3800
- 百奥莱博
- YT031-EYS
- 北京
- 2025年07月09日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
108
- 英文名：
Biotin Random Prime DNA Labeling Kit)
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
10次
在Klenow酶(3"-5"exo-)催化下，通过随机引物标记反应可以把生物素标记的Biotin-11-dUTP掺入到新合成的DNA探针中，这样就可以产生生物素标记的DNA探针。在随机引物标记反应过程中，一些标记好的DNA探针可以被Klenow酶从模板DNA链上驱赶下来。这样在模板量较少的情况下，通过随机引物标记反应，最后可以产生比模板DNA量更多的生物素标记DNA探针，可多达1～15倍左右。
本试剂盒可以用于多种DNA模板的标记，包括DNA片段、线性化的质粒或cosmid、超螺旋DNA等。用于本试剂盒的模板DNA片段应不小于100bp，小于100bp的DNA模板可以使用百奥莱博生产的生物素3"末端DNA标记试剂盒(YT030)进行DNA探针标记。
用于本试剂盒的模板DNA的量应不少于10ng，推荐的模板用量为100ng～1μg。
本试剂盒中提供了已经用生物素标记好的Biotin-Control DNA，可以用作检测生物素DNA探针标记效率的对照。生物素标记DNA可以使用百奥莱博生产的化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒(YT032)或其它适当试剂盒进行检测。
产品组成：
| 组分 | 规格 |
| Random Primer in Buffer(5X) | 105μL |
| Klenow Fragment | 11μL |
| Biotin-Labeling Mix | 50μL |
| Ultrapure Water | 1mL |
| Biotin-Control DNA(3ng/μl) | 50μL |
| 探针标记终止液 | 100μL |
储存条件：-20℃。
使用方法：
- 在一离心管或PCR管内加入100ng～1μg DNA模板，再加入适量试剂盒提供的Ultrapure Water，至总体积为34μL。
说明：通常100～300ng DNA模板已经足够用于一次标记反应。 - 加入10μL Random Primer in Buffer (5X)，混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
- 沸水浴加热5分钟，或在PCR仪上100℃加热5分钟(如果不能设置100℃，99℃加热5分钟也完全可以)。
- 立即放置到预先准备好的冰水浴中至少2～3分钟。
- 加入5μL Biotin-Labeling Mix。
- 加入1μL Klenow Fragment，混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
- 37℃孵育1小时或过夜(不宜超过20小时)。37℃孵育过夜可以显著增加生物素标记DNA的产量，因此推荐孵育过夜(12-20)小时。
- 加入3μL探针标记终止液，混匀，终止标记反应。至此标记反应已经全部完成，标记好的DNA可以-20℃保存。
- 此时探针可以直接用于探针标记效率的检测及Southern、Northern等后续操作。
- 整个探针标记反应的流程参见下表：
成分 用量 100ng-1μgDNA模板 xμl Ultrapure Water (34-x)μl Random Primer in Buffer (5X) 10μL 100℃ 5分钟，立即冰浴冷却 Biotin-Labeling Mix 5μL Klenow Fragment 1μL 总体积 50μL 37℃孵育过夜 探针标记终止液 3μL -20℃保存，可用于标记效率的检测及Southern、Northern等后续检测。 - 探针标记效率的检测：可以对标记好的探针进行适当梯度稀释后，使用百奥莱博生产的化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒(YT032)或其它适当的方法进行检测。通常探针的标记效率可以参考下表：
模板DNA量 生物素标记DNA产量 － 孵育1小时 孵育20小时 10ng 80ng 900ng 30ng 150ng 1350ng 100ng 350ng 1650ng 300ng 750ng 2200ng 1000ng 1300ng 2600ng 3000ng 1600ng 2600ng
注意：具体的探针标记效率还和模板DNA的长度、纯度等因素有关，上表的数值仅供参考。 - 使用本试剂盒所获得的生物素标记DNA的长度通常在数百bp左右。具体的长度因模板的长度而有所不同。例如模板DNA的长度为1kb，则生物素标记DNA产物的长度通常为100～1000bp，平均长度约为300bp左右。
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