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NGS Fast DNA Library Prep Set for Illumina
长期
北京百奥莱博科技有限公司
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特别提示:包括二代测序DNA快速建库试剂盒(Illumina平台)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
组份 | 24次 | 96次 |
End Prep Enzyme Mix | 48μl | 192μl |
10x End Repair Reaction Buffer | 200μl | 800μl |
T4 DNA ligase | 48μl | 192μl |
T4 DNA ligase Buffer | 400μl | 2×800μl |
HiFidelity 2×PCRMasterMix | 600μl | 2×1.2ml |
试剂 | 体积 |
10×End Repair Reaction Buffer | 6.5μl |
End Prep Enzyme Mix | 2μl |
fragmented DNA | X(5ng-1μg) |
RNase-free Water | Up to 65μl |
试剂 | 体积 |
T4 DNA ligase buffer for illumina | 14μl |
T4 DNA ligase | 2μl |
Adaptor | 2.5μl |
DNA文库大小 | 插入片段 | 150bp | 200bp | 250bp | 300-400bp | 400-500bp | 500-700bp |
插入片段+adaptor | 270bp | 320bp | 400bp | 400-500bp | 500-600bp | 600-800bp | |
磁珠用量 | 第一次选择 | 85 | 70 | 55 | 50 | 45 | 35 |
第二次选择 | 25 | 25 | 20 | 20 | 20 | 15 |
试剂 | 体积 |
连接adaptor后的DNA片段 | 23μl |
2×HiFid elity PCR Mix | 25μl |
Univesial primer | 1μl |
Index primer | 1μl |
总体积 | 50μl |
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 98℃ | 30 s | |
变性 | 98℃ | 10 s | 6-16个循环 |
退火 | 65℃ | 30 s | |
延伸 | 72℃ | 30 s | |
终延伸 | 72℃ | 5 min |
文库平均总长度 | 近似转换公式 | 成簇反应DNA文库浓度 |
200 bp | 1ng/μl=7.5 nM | 6-12 pM |
300 bp | 1ng/μl=5.0 nM | 6-12 pM |
400 bp | 1ng/μl=3.8 nM | 6-12 pM |
500 bp | 1ng/μl=3.0 nM | 6-12 pM |
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