人DNA定量标准

如何获得高质量、高可信度的荧光定量PCR结果--高质量cDNA标准

荧光定量PCR（Real-time PCR）是目前基因表达定量分析的重要检测手段，已经为越来越多的研究者所采用。“好的开始是成功的一半”，Perrez-Novo等(Perrez-Novo et al., 2005)曾报道获得高质量RNA对后续PCR定量结果的准确性是非常重要的，而高质量RNA是获得高质量cDNA的必要条件，所以本文着重介绍一下如何获得高质量cDNA。 高质量cDNA应具备以下几个特点：无基因组DNA残留、能准确反应出样本真实的转录情况和信息完整且浓度适当等特点。

蛋白质的定量法与标准曲线的制备

蛋白质的定量工具。此法的优点是迅速、简便，不消耗样品及不受低浓度的盐类干扰。但此种测定方法的缺点是，许多其它物质在此波长附近亦有吸光现象，如核酸虽在260nm会有最大吸光值，但在280nm处仍会有吸光的现象。一般而言，纯的蛋白质之280nm/260nm比值约1.75，但此数值会依蛋白质含方香族胺基酸含量而变，因此利用此方法测定蛋白质的浓度最大的缺点是，对于测定那些与标准蛋白质中色胺酸(tryptophan)、酪胺酸(tyrosine)含量差别大的蛋白质，测定的浓度会有一定的误差;再者，样品中

免疫定量分析中标准品的制备

标准品是标记免疫分析定量的依据。标准品的正确与否直接影响样品的测定结果。如果在连续测定中，或各实验室之间使用的标准品不一致，则可影响到实验结果的可比性。为此，对标记免疫分析所使用的标准品应满足如下要求。一、标准品的要求1、化学结构：原则上标准品应与被测物具有完全相同的化学结构，包括相同的立体化学结构。但在实际工作中，用化学结构完全相同的物质作标准品是十分困难的。这是由于一方面来源有限，另一方面有些被测物本身的化学结构还不清楚，或是有明显的异型性。所以有时也用结构类似的物质作标准品。此时，应充分