高尔基体提取试剂盒

特别提示：包括高尔基体提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：高尔基体提取试剂盒
英文名称：Golgi body extraction kit

产品货号：高尔基体提取试剂盒
产品规格：50T/100T

高尔基体(Golgi apparatus,Golgi bodies)是由许多扁平的囊泡构成的以分泌为主要功能的细胞器。又称高尔基器或高尔基复合体；高尔基体是由数个扁平囊泡堆在一起形成的高度有极性的细胞器。常分布于内质网与细胞膜之间，呈弓形或半球形，凸出的一面对着内质网称为形成面(forming face)或顺面(cis face)。凹进的一面对着质膜称为成熟面(mature face)或反面(trans face)。顺面和反面都有一些或大或小的运输小泡，在具有极性的细胞中，高尔基体常大量分布于分泌端的细胞质中。因其看上极像滑面内质网，因此有科学家认为它是由滑面内质网进化而来的。
高尔基体中的酶主要有糖基转移酶、磺基-糖基转移酶、氧化还原酶、磷酸酶、蛋白激酶、甘露糖苷酶、转移酶和磷脂酶等不同的类型。高尔基体的主要功能将内质网合成的蛋白质进行加工、对比分类、与包装，然后分门别类地送到细胞特定的部位或分泌到细胞外。
本试剂盒可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的高尔基体提取。提取得到的高尔基体具有完整生物活性，可以用于高尔基体功能研究、蛋白提取等各种下游应用。
除了高尔基体提取试剂盒，我公司还有细胞核提取、线粒体提取等各种亚细胞结构的提取试剂盒以及相关的蛋白质提取试剂盒。
我们可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、液体、土壤等不同样本的蛋白提取试剂盒，包含用于非双向电泳和双向电泳等不同下游应用的试剂盒以及含去垢剂成分和不含去垢剂成分的蛋白提取试剂盒，专用于蛋白质谱检测的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒可供选择。还可提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体等不同细胞器的提取试剂盒。

储存条件：2-8℃保存。
有效期：一年。
使用前请仔细阅读产品说明书
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。
使用安全： 使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如
果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
1．正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验结果。
2．螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
3．禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
4．样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5．最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
6．实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● 移液器、吸头 ●离心机及离心管
● 涡旋混匀器、振荡器、Dounce匀浆器 ●冰箱，冰盒 PBS
使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
● 最好使用Dounce匀浆器匀浆，如果没有Dounce匀浆器，用玻璃匀浆器匀浆也可，但是高尔基体回收率会下降。

使用方法：
细胞高尔基体提取：
1.取1-2×107个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；
【注】
● 贴壁培养细胞用胰酶消化下来或者用刮刀刮取均可。
2．用冷PBS 洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3．加入500μl冷的试剂A，置冰上10分钟。
4．用Dounce匀浆器充分匀浆几分钟，然后在4℃，1000g 力条件下离心5分钟。
5．弃沉淀，将上清吸入另一预冷的干净离心管。
6．在4℃，3000g 力条件下离心10分钟。
7．弃沉淀，将上清吸入另一预冷的干净离心管。
8.在4℃，5000g力条件下离心10分钟。
9．弃上清，将上清吸入另一预冷的干净离心管。
10.在上清中加入10μl试剂WT，在4℃，20000g力条件下离心20分钟。
11．弃上清，留沉淀。
12.在沉淀中加入500μl冷的试剂B，混匀。
13.在4℃，20000g力条件下离心30分钟。
14．弃上清，沉淀用高尔基体保存液重悬。
【注】
● 也可以不用试剂D，直接根据下游应用需要用合适的缓冲液重悬保存或直接用于下游实验。
15．即得到高尔基体样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。
组织高尔基体提取：
1．取50-100mg 新鲜动物组织样本，用PBS洗涤干净。
2．用剪刀尽可能剪碎，用冷PBS 洗涤两次。
3．加入500μl冷的试剂A，置冰上10分钟。
4．用Dounce匀浆器充分匀浆几分钟，然后在4℃，1000g 力条件下离心5分钟。
5．弃沉淀，将上清吸入另一预冷的干净离心管。
6．在4℃，3000g 力条件下离心10分钟。
7．弃沉淀，将上清吸入另一预冷的干净离心管。
8.在4℃，5000g力条件下离心10分钟。
9．弃上清，将上清吸入另一预冷的干净离心管。
10.在上清中加入10μl试剂WT，在4℃，20000g力条件下离心20分钟。
11．弃上清，留沉淀。
12.在沉淀中加入500μl冷的试剂B，混匀。
13.在4℃，20000g力条件下离心30分钟。
14．弃上清，沉淀用高尔基体保存液重悬。
【注】
● 也可以不用试剂D，直接根据下游应用需要用合适的缓冲液重悬保存或直接用于下游实验。
15．即得到高尔基体样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。

除了高尔基体提取试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：中pH缓冲液套装
货号：BTN100829
规格：30次
Native-PAGE，非变性聚丙*酰胺凝胶电泳是目前电泳法分离非变性蛋白质的主要方法，实验过程杜绝变性剂接触目的蛋白质，常用于同工酶的鉴定和提纯。本产品可快速制备分离胶，不含SDS，并确保配制分离胶的精确pH值。

产品组成：

成份	规格(30次*)
4×浓缩胶配胶液(pH5.5)	100ml
4×分离胶配胶液(pH7.5)	200ml
中pH电泳液(pH7.0)	10L(干粉)
5×中pH上样液	1ml
使用手册	1份

*注：1次是指的一次mini-Gel电泳

储存条件：常温运输及保存(5×中pH上样液需要-20℃保存)，有效期为一年。

名称：Bradford蛋白浓度试剂盒
货号：RFT058
规格：1000次
Bradford蛋白质浓度测定试剂盒是根据考马斯亮蓝G-250法研制而成，其原理是考马斯亮蓝G-250在酸性条件下和蛋白质结合，使得染料最大吸收峰从465nm变为595nm，在一定的线性范围内，反应液595nm处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比，测定595nm处吸光度的增加即可进行蛋白定量。每个试剂盒可以检测1000个样品(使用微孔板)

试剂盒组成：

组份	包装	贮存方式
考马斯亮蓝G-250染色液	200 ml	4℃
牛血清白蛋白(BSA)标准溶液(5 mg/ml)	2×1 ml	-20℃
PBS溶液	10 ml	4℃
说明书	1份

产品特点：
1、检测速度极快，10个样品只需不足10分钟即可完成。
2、灵敏度高，检测浓度下限可达25μg/ml (测定浓度范围在50-1000μg/ml内有较好的线性关系)，最小检测蛋白量可达0.5μg，待测样品体积为1-20μl。
3、Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1M，DTT的浓度可高达5mM。然而，此方法测定蛋白浓度受高浓度的去垢剂影响，故不能适用膜蛋白样品的浓度测定。需确保测定样品中SDS浓度低于0.01%，Triton X-100浓度低于0.05%，Tween 20, 60, 80浓度低于0.015%。测定含去垢剂的样品推荐使用BCA蛋白浓度测定试剂盒

储存条件：室温，有效期12个月。

名称：牛脱铁转铁蛋白
货号：SY0457
规格：100mg
Bovine Transferrin（牛转铁蛋白）是一种广泛使用的生物可利用铁来源，细胞和组织培养中重要的促生长营养物。采用新西兰来源牛血浆，利用亲和色谱层析技术制备而得，保证了产品的高纯度、蛋白完整性、无辛酸残留及提取过程无热或溶剂引起的变性效应，符合ISO质量体系，确保了高质素的产品安全标准。

Bovine Transferrin（牛转铁蛋白）以高纯度、热处理、冻干粉状态提供，并有脱铁（apo）或饱和铁（holo）两种形式。

饱和铁转铁蛋白（holo transferrin）持续地释放铁离子，并形成脱铁转铁蛋白(apo transferrin)。需要根据具体培养条件选择，如DMEM/F12培养基中含有高浓度的铁，一般选择脱铁转铁蛋白。

转铁蛋白冻干粉需要保存在冷藏状态下，使用之前再溶解。一般用PBS或者纯水在室温下将转铁蛋白冻干粉溶解成储液，浓度为2 mg/ml，然后用无菌滤膜进行过滤，滤液可在无菌条件下4℃保存5-10天。

CAS：9048-46-8
分子量（M. Wt.）：66 kDa
外观：米色（灰白色）粉末
湿度：：＜5.0%
灰分（Ash）：＜2.0%
pH值（pH Value）：6.5-7.5
白蛋白（Albumin）：≥98%（电泳）
总蛋白（Protein）：≥97%
重金属（Heavy Metals）：≤20 ppm
内毒素：＜1.0 EU/mg
溶解性：易溶于水（7%（w/v）in water）
储存条件：4℃

名称：高脂肪样本蛋白提取试剂盒
货号：HR0119
规格：50T/100T
高脂肪样本蛋白提取试剂盒适用于从各种脂肪含量高的细胞和实体组织，如脂肪细胞、脂肪肝细胞、脑、脂肪、脂肪肝脏、结缔组织、胸腺组织等动物组织中提取总蛋白。
提取过程简单方便，可在1小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒含有的独特配方能够溶解细胞膜包括细胞质膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。
本试剂盒提取的蛋白不可用于2D电泳。如下游实验需要用于2D电泳，请使用货号HR0165的试剂盒。

储存条件：蛋白酶抑制剂-20℃保存；蛋白提取液和离心柱室温保存。
有效期：一年。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

产品特点：
1．使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2．将蛋白提取的时间缩短至 30分钟-1小时。
3．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5．蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。
该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● 移液器、吸头 ●离心机及离心管
● 涡旋振荡器 ●冰箱，冰盒

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
●蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
●可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
● Western 实验内参可以选用beta-actin、GAPDH、Tubμlin。
● 更多蛋白提取常见问题分析等资料可以联系本公司索取。
细胞蛋白提取：
1．提取液制备：每 500μl冷的蛋白提取液中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物混匀后置冰上备用。
2．取5-10×106个细胞①，在4℃，1000rpm条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3．用冷 PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4．每 5×106个细胞中加入500μl冷的蛋白提取液，混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟。
5.在 4℃，14000rpm条件下离心15分钟。
6．将含有脂肪的上清吸入蛋白离心管中，套上液体收集管，在 4℃，12000rpm条件下离心5分钟。
7．将液体收集管中的液体吸入另一预冷的干净离心管，即可得到蛋白样品。
8．将蛋白离心管中的脂肪杂质用吸头或合适工具刮出，即可用于处理上步未处理完的样品或其他待处理样品。
9．将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验③。
注：
①细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。
② 建议用BCA法进行蛋白定量。
③蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
组织蛋白提取：
1．提取液制备：每 500μl冷的总蛋白提取液中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2．取100mg组织样本剪碎，加入蛋白提取液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体①。
3．将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在4℃，10000rpm条件下离心5分钟。
4．将含有脂肪的上清吸入蛋白离心管中，套上液体收集管，在4℃，12000rpm条件下离心5分钟。
5．将液体收集管中的液体吸入另一预冷的干净离心管，即可得到蛋白样品。
6．将蛋白离心管中的脂肪杂质用吸头或合适工具刮出，即可用于处理上步未处理完的样品或其他待处理样品。
7．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
注：
①用液氮研磨的方法更佳，具体方法可以联系本公司hhsky1017@163.com 索取详细资料。