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- CK12
- 美国
- 2025年09月03日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 检测方法：
WST
- 库存：
现货
- 供应商：
上海研卉生物科技有限公司
- 规格：
100 tests
死细胞检测试剂盒
Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST
货号: CK12
细胞毒性LDH检测试剂盒
本试剂盒可以测定受损细胞所释放出的LDH，其原理是LDH 催化乳酸生成丙酮酸和NADH，NADH 通过电子载体可将水溶性四唑盐WST®（无色）还原成甲臜产物（橙色），WST®甲臜产物的吸光度与LDH 的量呈正比，利用此原理可以测定死细胞和受损细胞的数量。
本试剂盒中试剂不会和活细胞反应，而且对细胞无损害，可以直接添加到含有细胞的培养基中检测（一步法）。也可以分离细胞后，加到培养基中检测( 低损伤法，分离的细胞可以做其他实验)。本试剂盒采用稳定性高的WST®，配置后的溶液可以长时间保存，不需要现配现用，适用于高通量筛选。
＊低损伤法 ：贴壁细胞使用平底96 孔板, 悬浮细胞使用圆底或V 底96 孔板。
5）在37 ℃ CO2 培养箱中培养。＊培养时间设定跟实际细胞毒性实验培养时间一致。
6）在高对照孔中加入20 μl Lysis Buffer。
7）在37 ℃ CO2 培养箱中培养30 min。
8）96 孔板离心2 min(250×g)。
9）从每个孔中吸取100 μl 上清液至新的96 孔板中。＊为了避免吸出细胞，请小心吸取上清液。
10）在每孔中加入100 μl Working Solution。采用包裹铝箔等方法避光，在室温反应30 min。
11）在每孔中加入50 μl Stop Solution。
12）用酶标仪测定490 nm 的吸光度。
＊用贴壁细胞时，接种细胞至96 孔板过夜预培养，换成新的100 μl 培养基后，进行操作步骤2）。
2）加入100 μl 含有药物的培养基（表2）。
3）在37 ℃ CO2培养箱内培养合适的时间。
4）在高对照孔中加入20 μl Lysis Buffer 后，在37 ℃ CO2培养箱内培养30 min。
5）96 孔板离心2 min(250×g)。
6）从每个孔中吸取上清液100 μl 至新的96 孔板中。＊为了避免吸出细胞，请小心吸取上清液。
7）在每个孔中加入100 μl Working Solution 后，在避光、室温的条件下培养30 min。
8）在每个孔中加入50 μl Stop Solution。
细胞损伤率(%) = [(A-C)/(B-C)] ×100
A ：样品的吸光度 （样品孔- 样品Blank 孔）
B ：高对照的吸光度 （高对照孔- 高对照Blank 孔）
C ：低对照的吸光度 （低对照孔- 背景Blank 孔）
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文献和实验大鼠 乳酸脱氢酶（LDH ） 酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中 乳酸脱氢酶（ LDH ） 的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中 大鼠 乳酸脱氢酶（ LDH ） 水平。用纯化的 大鼠 乳酸脱氢酶（ LDH ） 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 乳酸脱氢酶（ LDH ） ，再与 HRP 标记
1. 原理：LDH (乳酸脱氢酶） 是稳定的胞浆酶，存在所有的细胞中，当胞膜损伤时快速释放到细胞培养液中。 LDH 活性通过两个酶催化反应： LDH 氧化乳酸盐生成丙酮酸盐，然后丙酮酸盐和四唑盐 INT 反应生成甲（ formazan ）结晶。甲（ formazan ）结晶量在培养液中的增加，与裂解的细胞数增加直接相关。甲（ formazan ）结晶染料是水溶的，可以用分光光度计在 500nm 波长检测。通过检测细胞培养上清中
1）测定方法 1．用含5％小牛血清的RPMI-1640培养液将靶细胞调整到5×104～2×105/ml，此浓度需根据情况预先标定。 2．在96孔圆底细胞培养板中加入靶细胞，每孔加100μl。3个效应细胞自然释放对照孔不加靶细胞，只加100μl培养液。 3．向各孔加100μl效应细胞，效应细胞与靶
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