西蒙氏枸橼酸盐琼脂图片

西蒙氏枸橼酸盐琼脂图片【实验方法】
1. 培养基阳性组：取稀释后的各试验菌悬液1ml分别加于预先制备的试管培养基中，每种细菌接种两支试管。同时分别取1ml菌悬液加于无菌空平皿中，用于计数，每种细菌做两个平板。
2. 培养基阴性组：即空白对照，即不添加菌液。
3. 接种量计数：步骤1中的平皿中，细菌倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，霉菌和白色念珠菌倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基。同时每种培养基做1个空白。
4. 培养条件：
   无菌检查：20～25℃培养14天或直至出现浑浊（不超过14天）
   MPN计数：30～35℃培养箱中培养3天
   控制菌检查：30～35℃培养箱中培养18～24小时
   倾注计数用的的胰酪大豆胨琼脂培养基平板置30～35℃培养箱中培养3天
   倾注计数用的沙氏葡萄糖琼脂培养基平板置20～25℃培养箱中培养3～5天
产品名称：西蒙氏枸橼酸盐琼脂图片
英文名称：Simmons Citrate Agar
产品规格：250g
产品用途：用于肠道菌的柠檬酸盐利用试验(GB标准)用途：用于肠道菌的柠檬酸盐利用试验成分(g/L)氯化钠 5.0硫酸镁 0.2磷酸二氢铵 1.0磷酸氢二钾 1.0柠檬酸钠 5.0琼脂 15.0溴麝香草酚兰 0.08pH值6.8 ± 0.1 25℃用法称取本品 27.3g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
产品图片：

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操作步骤：
1、西蒙氏枸橼酸盐琼脂图片按、 SN 标准、 FDA 标准或其它方法制备样品液；
2、取 25 克样品液加入 225ml mEC 肉汤或 mTSB 肉汤中， 37 ℃ 增菌培养 18-24 小时；
3 、用 3mm 接种环取 1 环增菌液，划线接种到 O157 菌显色培养基上，做 2 个平板；
4 、 37 ℃培养 18-24h ， O157:H7 菌显紫色 ， 大肠杆菌和大肠菌群显暗蓝色， 其它细菌显黄色或无色；
5 、对典型菌落可做 O157:H7 菌血清学试验和全套生化试验。
培养基制备：
   被检培养基：称取培养基30.0g于1000ml纯化水中,微温溶解，分装试管，121℃高压灭菌15分钟,冷却，备用。
另准备胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基进行稀释菌悬液计数，培养基灭菌后置于44.5℃水浴保温待用。
菌液制备与稀释：
1.西蒙氏枸橼酸盐琼脂图片金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、枯草芽孢杆菌
挑取四代以内（含四代）上述菌种的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24h，使用pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释，制成每1ml含小于100cfu的菌悬液。
(稀释梯度：通常情况下为10-6～10-7、枯草芽孢杆菌10-5～10-6)
2. 白色念珠菌
挑取四代以内（含四代）的白色念珠菌新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，经20～25℃培养2～3天；使用pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释，制成每1ml含小于100cfu的菌悬液。
(稀释梯度：通常情况下为10-6～10-7)
3. 黑曲霉
挑取四代以内（含四代）的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基斜面中，经20～25℃培养5～7天（生长大量黑色菌丝）,加入5ml含0.05%聚山梨脂80的pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱。使用含0.05%聚山梨脂80的pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或含0.05%聚山梨脂80的0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释，制成每1ml含小于100cfu的菌悬液。
(稀释梯度：通常情况下为10-5～10-6，因菌丝数量不同，可能有误差)
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